WWOX，STAT3與c-myc在非小細胞肺癌中的表達及相關(guān)性分析.pdf

1、目的:研究WWOX(WWdomain-containing oxidaseredurase)、信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子3(Signal transducer and activator oftranscription 3,STAT3)、c-myc在非小細胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)與肺正常組織中的表達及三者在非小細胞肺癌中的相互關(guān)系。
　　 方法:應用免疫組織化學S-P法,檢測WWOX

2、、STAT3與c-myc在40例非小細胞肺癌組織、20例正常肺組織中的表達情況,并分析其與各臨床病理指標之間的關(guān)系。NSCLC組織均為手術(shù)切除獲得,術(shù)前未作任何放療或化療。其中男性29例,女性11例,年齡35～78歲,其中<60歲者22例,≥60歲者18例。按WHO組織學分類、分期,鱗癌者26例,腺癌者14例；其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者18例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例；腫瘤≤3鋤者14例,>3cm者26例；高.中分化者30例,低分化者10例,Ⅰ-Ⅱ

3、期者24例,Ⅲ-Ⅳ期者16例。將標本組織固定,脫水,浸蠟后制成組織蠟塊,常規(guī)4μm連續(xù)切片。切片常規(guī)脫蠟水化后,蒸餾水沖洗,磷酸鹽緩沖液(phosphate buffersaline,PBS)浸泡,高溫抗原修復,3％H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性,并用正常山羊血清封閉交叉反應。滴加一抗(STAT3兔抗人多克隆抗體,鼠抗人WWOX單克隆抗體,鼠抗人c-myc單克隆抗體)孵育,PBS沖洗后滴加生物素標記二抗孵育,PBS沖洗后滴加辣根酶標記

4、鏈霉卵白素工作液(S-A/HRP)孵育,PBS沖洗,DAB顯色,蘇木素復染,透明,封片觀察。以胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒、網(wǎng)織狀或棕褐色團塊為陽性細胞。其中WWOX蛋白的陽性表達信號主要在細胞漿中；STAT3蛋白在NSCLC組織中的陽性信號表達主要位于細胞漿中,少數(shù)位于細胞核中；c-myc蛋白的陽性表達信號主要位于細胞漿中。三者均采用半定量積分法判斷結(jié)果,即每張切片觀察10個高倍視野,每個高倍視野陽性細胞所占百分比與著色深淺進行打分:(

5、1)根據(jù)陽性細胞所占百分比評分:陽性細胞數(shù)≤5％為0分,6％～25％為1分,26％～50％為2分,51％～75％為3分,>75％則為4分,(2)根據(jù)著色強度進行評分:無顯色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分.取(1)(2)項評分的和值作為染色結(jié)果的評判標準:0分為陰性(一),1～3分為弱陽性(+),4～5分為陽性(++),6～7分為強陽性(+++)表達。
　　 結(jié)果:①WWOX在非小細胞肺癌組織中陽性表達為30％,

6、明顯低于肺正常組織(75％)；STAT3在非小細胞肺癌組織中陽性表達為92.5％,明顯高于肺正常組織(20％)；c-myc在非小細胞肺癌組織陽性表達為90％,明顯高于肺正常組織(15％)。經(jīng)過統(tǒng)計學分析,它們各自在肺癌組織和正常肺組織中的表達差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。②WWOX基因的表達與年齡、性別以及組織類型、TNM分期、腫瘤大小及腫瘤組織分化程度無相關(guān)性,與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.01),在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的非小細胞肺

7、癌組織中WWOX基因表達更少或缺失。STAT3、c-myc表達水平與非小細胞肺癌組織學類型有關(guān),在腺癌組織中的表達明顯高于鱗癌(P<0.01),與年齡、性別以及腫瘤組織分化程度、TNM分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。③STAT3蛋白與WWOX在非小細胞肺癌中的表達呈顯著負相關(guān)(r=-0.443,P<0.01)；④STAT3和c-myc蛋白在NSCLC組織中的表達無相關(guān)性(r=-0.084；P>0.05)；⑤WWOX和c-

8、myc蛋白在非小細胞肺癌中的表達無相關(guān)性(r=0.115,P>0.05)。
　　 結(jié)論:①STAT3蛋白在NSCLC中的表達增高,顯著高于正常肺組織,同樣,在NSCLC中c-myc蛋白的表達也是增高的,并且顯著高于正常肺組織,說明過度表達的STAT3蛋白和c-myc蛋白可能均參與了非小細胞肺癌的形成過程。WWOX蛋白在NSCLC組織中呈低表達,可能也參與了肺癌的形成機制。②WWOX基因的表達與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),在有淋巴結(jié)

9、轉(zhuǎn)移的肺癌組織中表達更少,其表達缺失或減少可能與腫瘤的侵襲性有關(guān)。STAT3、c-myc表達水平與非小細胞肺癌組織學類型有關(guān),在腺癌組織中的表達明顯高于鱗癌,與患者的年齡、腫瘤大小、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期無關(guān),組織學類型不同,其影響機制也不同,提示它們可能只在腫瘤發(fā)生過程中發(fā)揮作用,而與腫瘤進展、侵襲和轉(zhuǎn)移無關(guān)。③STAT3蛋白與WWOX蛋白的表達呈負相關(guān),在STAT3表達越高的肺癌組織中,WWOX的表達越少或表達缺失,兩