尾加壓素Ⅱ通過Smad2-3激活誘導心臟微血管內皮細胞間質轉化.pdf

1、背景與目的：尾加壓素II（Urotensin II, UII）是繼內皮素之后發(fā)現(xiàn)的強力縮血管活性肽，我們研究小組前期發(fā)現(xiàn)，UII能促進動脈外膜成纖維細胞向肌成纖維細胞表型轉化和血管纖維化，促進心肌成纖維細胞增殖和心肌纖維化發(fā)展。近年報道微血管內皮細胞在某些因素刺激下，能夠向間質成纖維細胞轉化，即內皮間質轉化（endothelial-mesenchymal transition，EndMT），從而參與心肌纖維化過程。其特征是細胞獲得間質細

2、胞標志物，如α-SMA，同時失去內皮細胞標志物，如血管內皮鈣粘蛋白(Vascular endothelial cadherin, VE-cadherin）和CD31。我們最近發(fā)現(xiàn)， UII能誘導EndMT發(fā)生，但其機制尚未完全闡明。為此，本工作在前期基礎上，擬進一步探討UII促進心臟微血管內皮細胞向間質轉化的細胞內分子機制。
　　方法：體外培養(yǎng)新生 SD大鼠心肌微血管內皮細胞，無血清培養(yǎng)至靜止期，分別加入不同濃度UII（10-10

3、-10-7mol/l）刺激不同時間（6h-48h），觀察UII對內皮細胞表型轉化的影響及對Smad2/3磷酸化水平的影響。為了探討UII對Smad2/3磷酸化水平的影響是否通過UII受體，提前30分加入UT阻斷劑SB710411，然后加入UII共同孵育至24小時。實驗結束時，采用蛋白免疫印跡試驗（Western blotting）測定細胞中α-SMA，VE-cadherin及p-Smad2/3的水平；采用RNA干擾技術，分別使Smad2

4、和Smad3基因表達下調，采用Western blotting檢測UII對細胞中α-SMA及VE-cadherin表達的影響，用流式細胞術檢測細胞上CD31的表達。
　　結果：1、UII（10-8mol/l）以時間依賴的方式促進心臟微血管內皮細胞中α-SMA的表達，刺激24h達到高峰，較對照增加120.2％；同時，UII以濃度依賴的方式抑制VE-cadherin表達，同樣刺激24h后，隨UII濃度（10-10-10-7mol/l）

5、逐漸增加，作用漸增強，在濃度為10-7mol/l時達高峰。
　　2、UII以時間依賴的方式上調Smad2/3磷酸化水平， UII（10-8mol/l）刺激24h時作用最強，較對照組增加811.6%；該作用可被 UII受體阻斷劑 SB-710411（10-6mol/l）所阻斷。
　　3、通過RNA干擾使Smad2和Smad3基因表達下調，可減弱心臟微血管內皮細胞上UII所致的α-SMA表達上調及VE-cadherin和CD31