應(yīng)用功能分類基因芯片篩選小鼠組織細胞肉瘤L-Ⅱ轉(zhuǎn)移相關(guān)基因.pdf

1、目的：采用基因芯片技術(shù)比較篩選前的小鼠組織細胞肉瘤L—Ⅱ與篩選后的具有高轉(zhuǎn)移能力的第9代轉(zhuǎn)移瘤細胞之間的基因表達譜，利用生物信息學(xué)方法篩選出與淋巴瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異基因。 方法：L—Ⅱ瘤細胞接種小鼠脅部皮下，取其肺轉(zhuǎn)移灶制成細胞懸液接種另一小鼠體內(nèi)，再取其肺轉(zhuǎn)移灶繼續(xù)傳代。對篩選前的L—Ⅱ瘤株和篩選后的第9代瘤株的細胞形態(tài)、生存時間、腫瘤生長曲線、免疫組化的差異進行了比較。再分別提取篩選前后瘤細胞的mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄將細胞

2、cDNA進行生物素標(biāo)記，用美國Superarray公司的含113個目的基因的腫瘤轉(zhuǎn)移基因芯片雜交，GEArray軟件對結(jié)果進行分析，篩選出傳代前后表達有差異的基因。對部分有差異表達的基因用RT—PCR和Westernblot進行分析鑒定。 結(jié)果：用體內(nèi)轉(zhuǎn)移灶連續(xù)傳代法篩選小鼠組織細胞肉瘤L—Ⅱ至第9代。形態(tài)學(xué)觀察：光鏡下篩選前后瘤細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)基本一致，細胞呈彌漫分布，細胞圓形至多邊形，大小不等，核圓形、梭形或不規(guī)則形，嗜堿性增強

3、，核漿比例增大，核分裂像較多，可見病理性核分裂像。生物學(xué)特性觀察：小鼠荷瘤生存時間顯示篩選前的L—Ⅱ瘤株為29.23±2.90天，篩選后的第9代瘤株為23.66±2.97天，P＜0.05，兩者差別有顯著性。腫瘤生長曲線：結(jié)果顯示篩選后的第9代瘤株生長速度快于篩選前的瘤株。免疫組化：篩選后的第9代瘤株IGF—1、MMP—10表達均較篩選前的L—Ⅱ瘤株增強。用腫瘤轉(zhuǎn)移基因芯片雜交篩選出傳代前后L—Ⅱ瘤細胞的差異表達基因共21個，涉及腫瘤轉(zhuǎn)移

4、發(fā)生發(fā)展的各個方面，其中上調(diào)基因17個，下調(diào)基因4個。其中：細胞黏附相關(guān)基因2個、基質(zhì)金屬蛋白酶2個、調(diào)節(jié)細胞周期基因3個、細胞生長與增殖基因5個、凋亡相關(guān)基因1個、轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因2個、其他6個。選擇其中有代表意義的4個基因利用RT—PCR和Westernblot進行驗證，結(jié)果證實所選基因在篩選前后瘤細胞中均有差異表達，與基因芯片的表達情況一致，說明基因芯片結(jié)果可信度較高。 結(jié)論： 1成功篩選出L—Ⅱ高侵襲轉(zhuǎn)移瘤株，篩選后