P5D2對宮頸鱗癌HCE1多細胞球體浸潤血管內皮細胞的作用.pdf

1、目的：建立宮頸鱗癌細胞HCE1多細胞球體浸潤人臍靜脈內皮細胞HUVEC模型，初步探討多細胞球體中整合素β1的表達與浸潤內皮細胞的關系，以及抗整合素β1單克隆抗體P5D2對HCE1多細胞球體浸潤血管內皮細胞的作用。 方法： （一）：建立宮頸鱗癌細胞HCE1多細胞球體浸潤單層人臍靜脈內皮細胞系HUVEC模型（以下均簡稱宮頸鱗癌HCE1浸潤模型）：將HCE1多細胞球體與HUVEC細胞共同培養(yǎng)，在模型建立的第0，1，4，7天分別

2、用倒置顯微鏡拍攝HCE1多細胞球體浸潤單層HUVEC細胞的程度。用Motic med數(shù)碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)軟件計算處理HCE1多細胞球體浸潤的范圍。 （二）：免疫細胞化學SABC法檢測HCE1單層細胞、HCE1多細胞球體以及HUVEC細胞中整合素β1的表達。 （三）：P5D2對HCE1多細胞球體浸潤血管內皮細胞的作用 1.分組：干預組P5D2終濃度為1ug/ml，對照組為等濃度的mIgG。 2.觀察：在模型

3、建立的第0，1，4，7天分別用倒置顯微鏡拍攝兩組模型中HCE1多細胞球體浸潤單層HUVEC細胞的程度。用Motic med數(shù)碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)軟件計算處理兩組模型中HCE1多細胞球體浸潤的范圍。 3.免疫細胞化學SABC法檢測P5D2干預宮頸鱗癌HCE1浸潤模型后和對照組第4天整合素β1表達。 結果： （一）宮頸鱗癌HCE1浸潤模型的建立。 1.HCE1單層細胞培養(yǎng)：顯微鏡下見細胞生長狀態(tài)良好，細胞胞漿透

4、亮，細胞貼壁后呈不規(guī)則對角形。 2.HCE1多細胞球體培養(yǎng)：HCE1細胞旋轉培養(yǎng)24小時可見細胞聚集成團，并隨培養(yǎng)時間的延長，結構更加緊密，直徑逐漸增大，培養(yǎng)至第4天開始出現(xiàn)壞死核心。 3.HUVEC細胞培養(yǎng)：胞體呈多角形，相互嵌合，為單層呈鋪路石狀排列。 4.宮頸鱗癌HCE1浸潤模型：倒置顯微鏡下觀察7天，在鏡下能很明顯的區(qū)分HCE1多細胞球體和HUVEC單層細胞，將宮頸鱗癌HCE1多細胞球體與人臍靜脈內皮細胞

5、HUVEC共同培養(yǎng)1小時，鏡下見HCE1多細胞球體緊密粘附于HUVEC單層細胞上，搖之不動，但不在一個焦距平面。宮頸鱗癌HCE1浸潤模型建立第1天，鏡下見HCE1多細胞球體出現(xiàn)解聚，向周圍HUVEC細胞擴散。第4天，鏡下見HCE1多細胞球體侵入HUVEC細胞，替代HUVEC細胞退縮的部位，形成侵襲聚集點，中間可見壞死核心，周圍可見單層HCE1細胞生長暈，HCE1多細胞球體與HUVEC細胞呈同一聚焦平面。第7天，鏡下見HCE1多細胞球體占

6、據面積更大，邊界與HUVEC細胞融合欠清。 （二）：免疫細胞化學SABC法檢測整合素β1的表達： HCE1多細胞球體中整合素β1陽性高表達率高于HCE1單層細胞，經統(tǒng)計學分析兩組比較差異有顯著性（Pearson X2=19.20，P<0.005），HUVEC細胞中整合素β1陰性表達。 （三）：P5D2對HCE1多細胞球體浸潤血管內皮細胞的作用 1.P5D2干預后宮頸鱗癌HCE1浸潤模型：倒置顯微鏡下觀察7天，藥物

7、干預后的模型浸潤程度明顯小于對照組，P5D2干預后第1天，鏡下見HCE1多細胞球體解聚，浸潤面積稍小于mIgG組，降低了32.16％，經統(tǒng)計學分析兩組差異有顯著性（p<0.001）。第4天鏡下與mIgG組相比，浸潤面積明顯降低，達60.77％，經統(tǒng)計學分析兩組差異有顯著性（p<0.001）。第7天鏡下與mIgG組相比，浸潤面積經P5D2阻斷更顯著，較對照組降低了84.68％，經統(tǒng)計學分析兩組差異有顯著性（p<0.001）。 2.

8、免疫細胞化學SABC法檢測P5D2干預宮頸鱗癌HCE1浸潤模型后第4天整合素β1表達：對照組整合素β1的陽性高表達率高于P5D2干預后宮頸鱗癌HCE1浸潤模型，經統(tǒng)計學分析兩者比較差異有顯著性（Pearson X2=21.69，P<0.005）。 結論： 1成功建立HCE1多細胞球體浸潤單層人臍靜脈內皮細胞HUVECC模型。2整合素β1在多細胞球體、浸潤模型中的表達上調可能與細胞粘附力、侵襲力增強有關。3抗整合素β1單克