CO2氣腹對人大腸癌細胞株CX1生長、增殖的實驗研究.pdf

1、背景:隨著上個世紀90年代初期Jacobs第一次開展腹腔鏡結直腸切除術以來,因其具有創(chuàng)傷小、恢復快、術后瘢痕小等特點,并且伴隨著微創(chuàng)相關手術器械如超聲刀、氫氣刀、腔內(nèi)切割吻合器(Endo-GIA)等的出現(xiàn),近10余年來腹腔鏡結直腸癌手術已逐漸在全世界范圍內(nèi)得到廣泛開展,是目前腹腔鏡用于消化道腫瘤手術中較成熟的一種手術方式。但一系列關于二氧化碳氣腹腹腔鏡術后惡性腫瘤生長加快、易復發(fā)、術后病人遠期生存率及如何預防等相關問題仍存在爭議,其中尤

2、以二氧化碳氣腹對惡性腫瘤的影響備受大家的關注,并成為近十余年來的一個研究熱點。一些研究者認為,惡性腫瘤的生長增殖和轉移與二氧化碳或腹腔鏡治療無關、而是與腫瘤細胞自身的特點有關。但同時也有研究者提出了不同的看法,他們認為二氧化碳氣腹對惡性腫瘤的生長增殖有影響。目前關于二氧化碳氣腹促進惡性腫瘤生長、增殖的機制,國內(nèi)外有關此類的報道多數(shù)集中在機體免疫方面、癌細胞局部微環(huán)境改變、氣腹壓力大小等外源性調(diào)控途徑的研究,關于細胞增殖分裂的內(nèi)源性調(diào)控途

3、徑方面的報道相對較少。本課題主要通過如下兩部分的研究、探討二氧化碳氣腹條件下大腸癌CX1細胞體外生長增殖以及其細胞周期調(diào)控因子(CDK4和Cyclin D1)的表達情況,從細胞增殖分裂的內(nèi)源性調(diào)控途徑方面對二氧化碳氣腹促進惡性腫瘤生長增殖的機制進行研究。
　　第一部分CO2氣腹對人大腸癌細胞株CX1生長和增殖的影響。
　　【目的】通過本實驗建立的模擬腹腔鏡操作條件,觀察大腸癌CX1細胞在二氧化碳作用不同時間下細胞本身生長、增

4、殖能力的影響,研究二氧化碳氣腹對大腸癌細胞體外生長、增殖的作用并探討其相關機制。
　　【方法】根據(jù)實際操作腹腔鏡手術的環(huán)境,建立體外的二氧化碳氣腹模型。以腹腔鏡結直腸癌手術常用的氣壓15mmHg的二氧化碳氣體,分別作用于培養(yǎng)的大腸癌CX1細胞2h和4h兩個時間段,這類細胞作為實驗組。以沒有做處理的大腸癌CX1細胞為對照組。采用兩種實驗方法進行分析:(1)四甲基偶氮唑鹽比色方法(MTT法)將經(jīng)過處理的大腸癌CX1細胞分別繼續(xù)培養(yǎng)1~

5、5天,根據(jù)細胞的光吸收值測定其生長情況,同時繪制生長曲線;(2)流式細胞術(FCM)大腸癌CX1細胞處理方法同上,測定細胞周期后根據(jù)公式計算增殖指數(shù)。
　　【結果】根據(jù)MTT法和FCM法所得到的數(shù)據(jù):(1)實驗組細胞培養(yǎng)的第1~5天時間內(nèi),大腸癌CX1細胞2小時組和4小時組的光吸收值均高于相應的對照組(P<0.05),且在第3~5天中,光吸收值更是明顯高于對照組(P<0.01),(2)從生長曲線上看,實驗組細胞生長曲線的幅度均高于

6、相應的對照組,(3)實驗組細胞培養(yǎng)的第1~5天時間內(nèi),其增殖指數(shù)均高于相應的對照組(P<0.05),(4)實驗組處于增殖期的細胞比例均高于對照組(P<0.05)。
　　【結論】大腸癌CX1細胞經(jīng)過15mmHg壓力的二氧化碳氣腹處理后,自身的生長增殖速度加快,且處于增殖期的細胞數(shù)目增多,以上表明二氧化碳氣腹可以加快大腸癌CX1細胞的生長增殖。
　　第二部分CO2氣腹對人大腸癌細胞株CX1中CDK4和CYCLIN D1的影響

7、r>　　【目的】通過本實驗建立的腹腔鏡操作條件,二氧化碳氣腹作用于大腸癌CX1細胞2小時和4小時兩個不同時間段,研究其對細胞周期調(diào)控因子的影響,進一步探討二氧化碳氣腹對大腸癌細胞生長增殖的影響及發(fā)生機制。
　　【方法】根據(jù)實際操作腹腔鏡手術的環(huán)境,建立體外的二氧化碳氣腹模型。以腹腔鏡結直腸癌手術常用的氣壓15mmHg的二氧化碳氣體,分別作用于培養(yǎng)的大腸癌CX1細胞2h和4h兩個時間段,這類細胞作為實驗組。以沒有做處理的大腸癌CX1

8、細胞為對照組。將實驗組細胞繼續(xù)培養(yǎng)1~5天,采用免疫細胞化學法檢測細胞周期調(diào)控因子CDK4和Cyclin D1在大腸癌CX1細胞中表達情況。
　　【結果】(1)大腸癌CX1細胞中的周期調(diào)控因子CDK4和Cyclin D1陽性表達明顯;(2)在大腸癌CX1細胞培養(yǎng)的1~5天內(nèi),實驗組細胞CDK4和Cyclin D1的平均陽性光密度值(OD)均高于相應的對照組(P<0.01)。
　　【結論】在經(jīng)二氧化碳氣腹處理的大腸癌CX1細胞