海帶硫酸多糖對(duì)人大腸癌Lovo細(xì)胞株增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：大腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。近年來，盡管手術(shù)、放療、化療等綜合治療使大腸癌患者的術(shù)后生存得到了很大的改善，但療效并不樂觀。大腸癌患者早期常無明顯癥狀，多數(shù)患者就診時(shí)即己為中、晚期，還有15％-35％就診時(shí)就已發(fā)生轉(zhuǎn)移，而腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的重要原因之一。海帶硫酸多糖(Laminaria polysaccharidesulfate，LPS)是一種含有多種單糖和硫酸基的水溶性雜多糖，其生物學(xué)功能主

2、要集中在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、血脂及血糖調(diào)節(jié)等方面。海帶硫酸多糖從海帶中提取，我國是海帶(Laminaria japonica)生產(chǎn)大國，海帶產(chǎn)量占世界產(chǎn)量一半，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。而海帶是食藥兩用的褐藻類植物，其藥用價(jià)值在本草綱目和嘉佑本草等古醫(yī)書中已有記載。原材料易得，提取方法多種。Vlodavsky[3]等報(bào)道海帶硫酸多糖作為乙酰肝素酶抑制劑在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中能夠有效的抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。有文獻(xiàn)報(bào)道，體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)證實(shí)LPS具有抑制腫瘤細(xì)

3、胞增殖的作用，但其分子機(jī)制未見報(bào)道，本項(xiàng)目從LPS促進(jìn)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖及提高化療藥物的敏感性著手研究LPS的藥物作用機(jī)理。bcl-2是抗凋亡基因，且與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)。它通過其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物bcl-2基因蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)抗氧化作用和抑制鈣離子跨膜運(yùn)動(dòng)而調(diào)控細(xì)胞凋亡。NF-κBp65是一種重要的可誘導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，參與炎癥、免疫、細(xì)胞的增殖和細(xì)胞凋亡等多種生理、病理過程的基因調(diào)控。近年來發(fā)現(xiàn)NF-κBp65調(diào)節(jié)許多黏附、侵襲、

4、遷移相關(guān)因子的轉(zhuǎn)錄而參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，故降低NF-κBp65的表達(dá)將成為治療癌癥的新靶點(diǎn)。通過分析細(xì)胞周期變化及檢測bcl-2基因和NF-κBp65基因表達(dá)的變化，觀察海帶硫酸多糖抗腫瘤的機(jī)制，即海帶硫酸多糖通過抑制乙酰肝素酶的活性，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移的機(jī)制。它與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用，增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，可減少藥物的用量，提高腫瘤患者的治愈率和生存質(zhì)量。 方法：本研究以不同濃度的LPS處理大腸癌Lovo細(xì)胞

5、，用四甲基偶氮藍(lán)比色法(MTT)測定細(xì)胞增殖情況，細(xì)胞染色法觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)，用流式細(xì)胞儀記錄細(xì)胞周期改變、bcl-2及NF-κBp65基因表達(dá)情況，從而探討海帶硫酸多糖對(duì)人大腸癌Lovo細(xì)胞株的體外生長、凋亡及細(xì)胞周期的影響，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1.形態(tài)學(xué)觀察：掃描鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組：對(duì)照組細(xì)胞生長活躍，大小不等，細(xì)胞間有很多微絲樣的結(jié)構(gòu)互相連接。實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞形態(tài)變化較大，較多細(xì)胞變性及壞死，細(xì)胞由梭形變

6、為圓形，表面形成許多小泡形的凋亡小體。 2.LPS對(duì)Lovo細(xì)胞的抑制率：MTT比色法檢測LPS對(duì)Lovo細(xì)胞的增殖的抑制作用，從結(jié)果可見LPS對(duì)Lovo細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用，隨著濃度增加與時(shí)間延長該抑制作用漸增強(qiáng)，呈劑量時(shí)效依賴關(guān)系，其間差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 3.細(xì)胞周期變化：實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞用碘化丙錠染色后，用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期，發(fā)現(xiàn)LPS可改變Lovo細(xì)胞的細(xì)胞周期，三種濃度S期細(xì)胞百分率增加，G0

7、/G1期細(xì)胞百分率降低，細(xì)胞被阻滯于S期，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 4.bc1-2與NF-κBp65基因表達(dá)的改變：Lovo細(xì)胞有bc1-2高表達(dá)，LPS可降低細(xì)胞中的bc1-2基因蛋白的表達(dá)，且隨著LPS濃度的增加，改變愈加明顯。LPS作用后，Lovo細(xì)胞內(nèi)NF-κBp65的表達(dá)降低，隨著LPS濃度的增加，降低愈明顯，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較及實(shí)驗(yàn)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： 1.硫酸海帶