人大腸癌LOVO細(xì)胞株組蛋白單ADP核糖基化對(duì)HUVECs增殖和遷移的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討人大腸癌LOVO細(xì)胞株組蛋白單腺苷二磷酸核糖基化對(duì)HUVECs增殖和遷移的影響和可能機(jī)制。
　　方法：1.通過(guò)組蛋白精氨酸單ADP核糖基化位點(diǎn)突變?yōu)楸彼峄蛸嚢彼針?gòu)建慢病毒并轉(zhuǎn)染LOVO細(xì)胞。篩選出穩(wěn)定突變的LOVO細(xì)胞株作為實(shí)驗(yàn)組，空載體對(duì)照組為轉(zhuǎn)染慢病毒空載體的LOVO細(xì)胞株，空白對(duì)照組為未作處理的LOVO細(xì)胞株。2.將各組LOVO細(xì)胞培養(yǎng)上清液分別加入到 HUVECs培養(yǎng)液中，通過(guò) CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOV

2、O細(xì)胞組蛋白單ADP核糖基化減少對(duì)HUVECs細(xì)胞增殖能力的影響；同時(shí)，通過(guò)Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)觀察LOVO細(xì)胞組蛋白單ADP核糖基化減少對(duì) HUVECs遷移能力的影響。3.通過(guò) qRT-PCR檢測(cè)組蛋白單ADP核糖基化減少后LOVO細(xì)胞PTEN mRNA表達(dá)變化，同時(shí)通過(guò) western blotting檢測(cè)H3K4me3、PTEN、PI3K、Akt、p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1. T

3、ranswell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組HUVECs遷移穿過(guò)微孔膜的細(xì)胞數(shù)較空載體和空白對(duì)照組明顯減少（P＜0.05），其遷移抑制率為74.6％；增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組HUVECs增殖數(shù)比空載體和空白對(duì)照組明顯減少（P＜0.05），且隨著LOVO細(xì)胞培養(yǎng)上清液濃度的降低增殖抑制率逐漸降低。2. qRT-PCR顯示 PTEN mRNA表達(dá)增加。Western blotting結(jié)果顯示H3K4me3、PTEN表達(dá)增加，同時(shí)PI3K、p-Akt

4、、HIF-1α和VEGF表達(dá)降低。
　　結(jié)論：1. LOVO細(xì)胞組蛋白單 ADP核糖基化減少后能顯著抑制HUVECs的遷移和增殖能力，提示單 ADP核糖基化可能通過(guò)參與HUVECs增殖和運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)。2. LOVO細(xì)胞組蛋白單ADP核糖基化減少可以提高H3K4me3和PTEN的表達(dá)，同時(shí)降低細(xì)胞內(nèi)PI3K、p-Akt、HIF-1α、VEGF的表達(dá)。提示LOVO細(xì)胞組蛋白單ADP核糖基化減少導(dǎo)致H3k4me3和PTEN的增加，從而減少