日本囊對蝦黏著斑激酶和ADP核糖基化因子的研究.pdf

1、本研究論文對日本囊對蝦的黏著斑激酶(MjFAK)及小G蛋白ADP核糖基化因子(MjArf4)進行了初步研究，同時建立一套有效的噬菌體展示庫篩選方法以尋找與它們相互作用的蛋白，為今后研究MjFAK及小G蛋白在WSSV感染中的信號轉導機制奠定基礎。 FAK是一類非受體酪氨酸激酶，在高等生物中已經(jīng)被廣泛報道參與細胞的粘附、抗凋亡、actin重組以及腫瘤的發(fā)生。我們首次在甲殼綱動物中克隆到FAK。序列分析發(fā)現(xiàn)MjFAK中間含有保守的P

2、TK結構域和C端的FAT結構域。MjFAK的Tyr399，Tyr579被證實發(fā)生磷酸化。另外，在WSSV病毒感染日本囊對蝦的早期，其血細胞MjFAK蛋白的表達水平上調(diào)，引起MjFAK(pY399)和MjFAK(pY579)水平的上升。研究感染病毒的血細胞對Fn(Fibronectin)的粘附情況還發(fā)現(xiàn)，血細胞對Fn的粘附與MjFAK磷酸化水平相關。因此，我們推斷對蝦血細胞MiFAK在病毒入侵及宿主防御中都扮演重要角色。 Arf

3、s屬于Ras家族的小G蛋白，我們從日本囊對蝦中克隆一個屬于ClassⅡ的Arf(命名為MjArf4)。研究發(fā)現(xiàn)，WSSV感染72 h后，MjArf4的表達水平顯著上升，提示MjArf4與病毒感染有著密切聯(lián)系。進一步研究發(fā)現(xiàn)在MjArf4啟動子-18 bp處含有一個保守的CRE(cAMP response elemem)，啟動子活性分析表明該CRE在轉錄調(diào)控中可能有抑制MjArf4轉錄的作用。將MjArf4轉染入High Five昆蟲細胞