IL-21調(diào)節(jié)免疫平衡抑制大腸癌細胞生長的實驗研究.pdf

1、目的： 大腸癌是嚴重威脅人類生命健康的常見惡性腫瘤之一，目前主要采用手術(shù)、放療、化療相結(jié)合的治療方法，雖然治療手段較前有了較大進步，但療效并不樂觀。鑒于惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機體的免疫功能低下有關(guān)，免疫治療越來越受到重視。免疫平衡(Th1/Th2平衡)理論的提出，為惡性腫瘤的免疫研究提供了一個有力的工具。研究發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤患者普遍存在免疫力下降，Th1/Th2平衡向Th2型偏移。目前認為，糾正Th1/Th2失衡對機體是保護性的。本課

2、題旨在通過流式細胞學和ELISA方法測定、觀察大腸癌患者和接種Colon26細胞小鼠的Th1/Th2平衡偏移情況。同時以轉(zhuǎn)染IL-21基因的Colon26細胞(Colon26/IL-21)建立小鼠模型，以期其持續(xù)分泌IL-21，通過IL-21影響機體的Th1/Th2平衡，觀察調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡對大腸癌的影響。 方法： 第一部分：隨機選取于河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院外科手術(shù)的大腸癌患者30例為實驗組，術(shù)前經(jīng)病理證實，30例正

3、常人為對照組，術(shù)前空腹靜脈采血。①采血(EDTA-K2抗凝)后立即進行實驗，先用PMA作刺激原對T細胞進行活化，然后用流式細胞學方法，檢測CD4<'+>IFN-γ<'+>T細胞(Th1細胞)、CD4<'+>IL-4<'+>T細胞(Th2細胞)占CD4<'+>T細胞的百分數(shù)，再以二者相除得出Th1/Th2細胞比值。②采血后離心用ELISA法測定血清IFN-γ和IL-4濃度，并計算。IFN-γ/IL-4比值。用兩樣本t檢驗的方法比較實驗組和

4、對照組Th1細胞、Th2細胞數(shù)量、Th1/Th2細胞比值及IFN-γ、IL-4濃度、IFN-γ/IL-4比值有無差別。第二部分：取90只同齡Balb/c小鼠，隨機分為3組。第一組用小鼠結(jié)腸低分化腺癌Colon26細胞接種于爪墊內(nèi)側(cè)皮下；第二組用轉(zhuǎn)染IL-21基因的Colon26/IL-21細胞接種于小鼠爪墊內(nèi)側(cè)皮下；第三組以同體積生理鹽水注射于小鼠爪墊內(nèi)側(cè)皮下。觀察小鼠腫瘤生長情況。于接種后24日摘眼球取血，離心，用ELISA法測血清I

5、FN-γ和IL-4濃度，并二者相除得出IFN-γ/IL-4比值。采用完全隨機的單因素方差分析，比較三組之間血清IFN-γ、IL-4濃度和IFN-γ/IL-4比值有無差別。同時測定接種Colon26細胞小鼠和接種Colon26/IL-21細胞小鼠的腫瘤重量，統(tǒng)計二者有無差別。取小鼠腫瘤組織用HE染色的方法對比觀察接種Colon26細胞小鼠和接種Colon26/IL-21細胞小鼠腫瘤的組織、細胞學變化。 結(jié)果： 1 30例大

6、腸癌患者和30例正常人Th1細胞的測定值分別為11.78±5.04％和11.39±3.62％，兩樣本t檢驗P>0.05，無統(tǒng)計學差異；Th2細胞的測定值分別為16.4±7.02％和10.63±4.55％，P<0.01，有統(tǒng)計學差異；Th1/Th2比值分別為0.74±0.27和1.26±0.9，P<0.05，有統(tǒng)計學差異。血清IFN-γ濃度的測定值分別為6.26±1.43pg/ml和9.18±2.31pg/ml，兩樣本t檢驗P<0.05，

7、有統(tǒng)計學差異；IL-4濃度的測定值分別為8.88+1.30pg/ml和5.20±1.71pg/ml，P<0.01，有統(tǒng)計學差異；IFN-γ/IL-4比值的測定值分別為0.70±0.10和1.82±0.35，P<0.01有統(tǒng)計學差異。 2 ①接種Colon26細胞組小鼠腫瘤持續(xù)增大，接種Colon26/IL-21細胞組小鼠腫瘤于16天達到平均體積1.3mm<'3>，然后逐漸縮小。24天時處死小鼠后兩組腫瘤稱重結(jié)果，接種Colon2

8、6細胞組小鼠腫瘤平均重量2.48±0.31g，接種Colon26/IL-21細胞組小鼠腫瘤平均重量0.27±0.10 g，P<0.01，有統(tǒng)計學意義。②接種后24天時腫瘤HE染色證實接種Colon26細胞組小鼠和接種Colon26/IL-21細胞組小鼠爪墊組織均為惡性腫瘤組織。對比觀察，接種Colon26/IL-21細胞組小鼠腫瘤組織有萎縮、消退的表現(xiàn)。③血清IFN-γ、IL-4濃度測定結(jié)果：IFN-γ濃度接種Colon26/IL-21

9、細胞小鼠、接種Colon26細胞小鼠及正常小鼠的測定值分別為44.80±8.07pg/ml、26.40±2.31pg/ml和31.21±3.36pg/ml，統(tǒng)計表明三者之間兩兩比較均有差別。IL-4濃度接種Colon26/IL-21細胞小鼠、接種Colon26細胞小鼠及正常小鼠的測定值分別為134.61 ±1 6.41pg/ml、170.42±19.77pg/ml和120.60±16.38pg/ml，統(tǒng)計表明接種Colon26/IL-2

10、1細胞小鼠與接種Colon26細胞小鼠之間有差別，P<0.01；接種Colon26細胞小鼠與正常小鼠之間有差別，P<0.01；接種Colon26/IL-21細胞小鼠與正常小鼠之間無統(tǒng)計學差別，P>0.05。IFN-γ/IL-4比值接種Colon26/IL-21細胞小鼠、接種Colon26細胞小鼠及正常小鼠的測定值分別為0.33±0.06、0.16±0.01和0.26±0.03，統(tǒng)計表明三者之間兩兩比較均有統(tǒng)計學差別。 結(jié)論：