白樺脂酸抑制大腸癌細(xì)胞增殖與遷移能力的研究.pdf

1、研究目的：
　　 1.檢測(cè)白樺脂酸抑制大腸癌細(xì)胞SW480的增殖與遷移能力以及相關(guān)增殖基因的表達(dá)情況。
　　 2.將腫瘤細(xì)胞SW480注入裸鼠體內(nèi)使其局部成瘤，構(gòu)建大腸癌模型。
　　 3.造模成功后檢測(cè)白樺脂酸對(duì)大腸癌的治療作用，為大腸癌治療尋找新的思路。
　　 研究方法：
　　 1.白樺脂酸治療SW480細(xì)胞后，提取總RNA及蛋白質(zhì)，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Westernblot檢測(cè)其對(duì)轉(zhuǎn)錄因子

2、特化蛋白1和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平的影響。
　　 2.白樺脂酸治療SW480細(xì)胞后，鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分別觀察白樺脂酸對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移能力和細(xì)胞凋亡等生物學(xué)行為的影響。
　　 3.將SW480大腸癌細(xì)胞注入BALB/C裸鼠體內(nèi)建立大腸癌皮下移植瘤模型，隨后將裸鼠隨機(jī)分為三組：陰性對(duì)照組(玉米油)，低劑量組(20mg/kg/d)和高劑量組(40mg/kg/d

3、)。接種細(xì)胞22天后，裸鼠被處死，測(cè)量各組腫瘤的體積和重量。
　　 4.白樺脂酸治療裸鼠移植瘤后，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA在結(jié)直腸癌組織中的相對(duì)表達(dá)量；利用免疫組織化學(xué)染色顯示血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)變化和定位。
　　 研究結(jié)果：
　　 1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westernblot結(jié)果表明白樺脂酸治療48h后，大腸癌細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和轉(zhuǎn)錄因子特化蛋白1mRNA和

4、蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SW480加藥組(5，10，15，20μg/ml)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA的相對(duì)表達(dá)量在48h分別為0.97±0.01、0.82±0.03、0.39±0.03、0.28±0.01，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子蛋白抑制率在48h約為17％、34％、63.8％、78.8％；SW480加藥組(5，10，15，20μg/ml)轉(zhuǎn)錄因子特化蛋白1mRNA的相對(duì)表達(dá)量在48h分別為0.98±0.01、0.88±0.02、

5、0.46±0.03、0.31±0.01，轉(zhuǎn)錄因子特化蛋白1蛋白抑制率在48h約為14.8％、35.2％、63％、78.7％，提示白樺脂酸可以有效地抑制大腸癌細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和轉(zhuǎn)錄因子特化蛋白1的表達(dá)。
　　 2.與陰性對(duì)照組相比，加藥組細(xì)胞生長(zhǎng)受抑，形態(tài)發(fā)生明顯變化；MTT法和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藥物治療后大腸癌細(xì)胞增殖遷移能力受到明顯抑制；流式細(xì)胞儀分析顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率增加，并且呈劑量依賴：SW480實(shí)驗(yàn)組(5，10

6、，15，20μg/ml)凋亡率為1.2％、3.6％、9.8％、13.2％，而陰性對(duì)照組(DMSO)細(xì)胞凋亡率約為0.5％，BA(20μg/ml)時(shí)凋亡率最大，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示各組之間有差異(P＜0.05)。
　　 3.白樺脂酸高低劑量組腫瘤平均重量分別為0.43±0.21g，1.12±0.4g，與玉米油對(duì)照組相比重量明顯減低。
　　 4.白樺脂酸高低劑量治療組中，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA表達(dá)水平顯著減低(0.72±0.02

7、，0.38±0.01)；而在陰性對(duì)照組中為1.08±0.04。HE染色顯示在白樺脂酸治療組中腫瘤組織有壞死。免疫組化顯示血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子主要定位在胞核中，在白樺脂酸高低劑量組中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子蛋白陽(yáng)性表達(dá)明顯減低，灰度值明顯增加(156.2±3.3，121.1±2.8，P＜0.05)。
　　 研究結(jié)論：
　　 1.白樺脂酸對(duì)大腸癌細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和轉(zhuǎn)錄因子特化蛋白1mRNA和蛋白表達(dá)具有顯著抑制效果，細(xì)胞經(jīng)白樺脂酸