半夏生物總堿對癲癇大鼠EcoG、CEP及腦內(nèi)GABA受體和Glu受體的影響.pdf

1、本文研究目的：建立大鼠大腦皮層誘發(fā)電位(CEP)和癇性放電模型，證明CEP的變化可作為判定動物致癇、致癇程度以及在抗癲癇藥物研究中判定藥效的新型電生理指標(biāo)后，觀察半夏生物總堿(PTA)對癲癇大鼠大腦皮層腦電圖(EcoG)、CEP的影響，分析PTA對γ-氨基丁酸(GABA)受體、谷氨酸(Glu)受體以及腦內(nèi)GABA<,A>受體mRNA表達(dá)的影響，探討PTA抗癲癇作用的受體機(jī)制。 研究方法： (1)采用電刺激坐骨神經(jīng)和青霉素

2、(PNC)、谷氨酸分別協(xié)同誘發(fā)大鼠癲癇模型，用RM6240C型多道生物信號采集處理系統(tǒng)同步記錄癲癇大鼠EcoG和CEP，分析舌下靜脈注射(siv)PTA 400mg/kg對EcoG癇樣波潛伏期、頻率、振幅及CEP振幅的影響。 (2)采用Pearson相關(guān)分析法，對PNC模型對照組、Glu模型對照組、PTA+PNC及PTA+Glu組EcoG癇樣波頻率和CEP振幅分別進(jìn)行相關(guān)分析。 (3)采用大鼠CEP模型，以GABA和2-

3、氨基-5-磷?；焖狨?AP<,5>)為陽性對照，Glu和PNC為工具藥，CEP振幅為觀察指標(biāo)，分別siv不同劑量GABA、AP<,5>、PTA，通過累加給藥后，繪制三藥的量效曲線，觀察Glu和PNC對各藥量效曲線的影響，計算各藥的IC<,50>，比較三藥對CEP振幅的抑制強(qiáng)度。通過量效曲線分析，判定PTA對GABA受體和Glu受體的作用。 (4)采用青霉素慢性點燃大鼠模型及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)，觀察灌胃兩種劑

4、量PTA對癇性發(fā)作潛伏期、發(fā)作程度及腦內(nèi)GABA<,A>受體mRNA表達(dá)的影響。 研究結(jié)果： (1)電刺激大鼠坐骨神經(jīng)后，可在大腦皮層對側(cè)相應(yīng)感覺區(qū)汜錄到典型的CEP，分別側(cè)腦室注射PNC、Glu后，EcoG均出現(xiàn)明顯的癇樣波，當(dāng)EcoG癇樣波頻率高時，CEP振幅也相應(yīng)增高。PTA可使電刺激坐骨神經(jīng)和PNC、Glu分別協(xié)同誘發(fā)癲癇大鼠的EcoG癇樣波潛伏期明顯延長、頻率和振幅顯著降低、CEP振幅亦明顯降低，與PNC模型對

5、照組、Glu模型對照組比較，均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。(2)相關(guān)分析結(jié)果：PNC組大鼠EcoG癇樣波頻率和CEP振幅變化的相關(guān)系數(shù)為r=0.947(P<0.01)，PTA+PNC組r=0.939(P<0.01)，Glu組r=0.930(P<0.01)，PTA+G1u組r=0.864(P<0.05)。(3)GABA、AP5、PTA均呈濃度依賴性抑制CEP振幅，加入GABA受體拮抗劑PNC后，可使GABA、PTA的量效曲線右移，但GA

6、BA的最大效能不變，而PTA的最大效能降低；加入Glu后，也使AP<,5>、PTA的量效曲線右移，但AP<,5>的最大效能不變，而PTA的最大效能降低。(4)青霉素慢性點燃大鼠腦內(nèi)GABA<,A>受體mRNA表達(dá)減少，與正常組有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)；兩種劑量PTA預(yù)防性干預(yù)可使癇性發(fā)作的潛伏期延長，與模型組相比均有顯著差異(P<0.01)，且發(fā)作程度減輕；還可使GABA<,A>受體mRNA表達(dá)明顯增加，與模型組相比均有統(tǒng)計學(xué)

7、差異(P<0.05，P<0.01)，與正常組無統(tǒng)計學(xué)差異。 研究結(jié)論： (1)通過對PNC、Glu誘發(fā)的EcoG癇樣波頻率和CEP振幅及受PTA作用影響后的EcoG癇樣波頻率和CEP振幅進(jìn)行相關(guān)分析，它們均具有很好的相關(guān)性。因此表明，CEP振幅的變化不僅可作為判定動物是否致癇及反應(yīng)致癇程度的電學(xué)指標(biāo)，而且在抗癲癇藥物的動物實驗研究中亦可作為判定藥效的新指標(biāo)。 (2)PTA可使側(cè)腦室注射PNC誘發(fā)癇樣放電的潛伏期明

8、顯延長，同時使PNC誘發(fā)的棘波發(fā)放頻率和振幅明顯降低，CEP振幅顯著降低，對陣發(fā)性去極化漂移(PDS)產(chǎn)生抑制作用，其機(jī)制可能與增強(qiáng)GABA系統(tǒng)抑制功能有關(guān)。 (3)PTA能明顯對抗側(cè)腦室注射Glu誘發(fā)的癇性發(fā)作，可使癇樣放電的潛伏期明顯延長、癇樣放電頻率和振幅明顯降低，同時顯著降低CEP振幅，這些作用均可作為PTA降低動物腦內(nèi)Glu興奮系統(tǒng)功能，調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制和興奮功能平衡，限制癇性放電的發(fā)生與擴(kuò)散的證據(jù)。 (4

9、)GABA、AP<,5>和PTA均呈濃度依賴性抑制CEP振幅；GABA與PNC對GABA受體產(chǎn)生競爭性拮抗；與GABA比較，PNC可使PTA的最大效能降低，表明PTA與PNC對GABA受體產(chǎn)生非競爭性拮抗；AP<,5>和Glu對Glu受體產(chǎn)生競爭性拮抗，而PTA和Glu對Glu受體呈非競爭性拮抗。三者對CEP振幅的抑制強(qiáng)度由大到小依次為AP<,5>>GABA>PTA。產(chǎn)生非競爭性拮抗可能與以下機(jī)制有關(guān)： ①PTA與PNC或Glu

10、作用于受體的不同部位，PNC或Glu與相應(yīng)受體結(jié)合后，導(dǎo)致受體的構(gòu)象發(fā)生改變，阻礙了PTA與相應(yīng)受體的結(jié)合，因而使其最大效能降低； ②PTA作用于受體信號傳導(dǎo)過程中的其他環(huán)節(jié)； ③PTA的抗癲癇作用與GABA、Glu受體沒有直接的關(guān)系，而是通過其他機(jī)制發(fā)揮其抗癇作用的。 (5)PTA可使癇性發(fā)作的潛伏期延長，發(fā)作程度降低，能明顯對抗青霉素慢性點燃大鼠引起的癲癇發(fā)作。其抗癲癇機(jī)制與增加腦內(nèi)GABA<,A>受體mRNA