外周型苯二氮卓受體對腦老化和癲癇敏感性的影響.pdf

1、目的1.自然衰老過程中部分腦區(qū)組織粗提物外周型苯二氮卓受體(PBRs)下降，但PBRs改變是否影響認知功能未見報道。通過觀察衰老大鼠學習記憶功能、腦細胞亞組分和血小板膜PBRs的改變以及脫氫表雄酮(DHEA)的干擾作用，探討PBRs在腦老化中的作用。 2.癲癇的反復發(fā)作有其重要的生化基礎，PBRs與癲癇發(fā)病有關，因此可能影響到癲癇敏感性。通過觀察癲癇患者血小板膜PBRs改變、癲癇大鼠發(fā)作行為和不同腦區(qū)PBRs的變化以及托吡酯(T

2、PM)的干擾作用，探討PBRs對癲癇敏感性的影響。 方法1.腦細胞亞組分和血小板膜PBRs的增齡改變及DHEA的干擾作用(1)自然衰老實驗：SD大鼠(雌性各半)分為乳鼠、3月齡、12月齡和24月齡共4組。動物斷頭取血制備血小板膜，提取大腦皮質和小腦半球線粒體，制備海馬突觸體和垂體細胞膜，應用放射配基結合實驗測定PBRs結合活力。 (2)衰老模型實驗：SD大鼠隨機分為對照組、D-半乳糖組、正常用藥組、溶媒對照組和藥物治療組

3、。連續(xù)注射D-半乳糖制備衰老動物模型。藥物治療的動物同時腹腔注射DHEA，隔日一次，共28次。利用Morris水迷宮測試動物學習記憶能力后，斷頭制備大腦皮質線粒體和海馬突觸體，測定PBRs最大結合容量(Bmax)和平衡解離常數(KD)。 2.PBRs對癲癇敏感性的影響及托吡酯的干擾作用 (1)臨床觀察：抽取37例難治性癲癇患者及50名健康獻血者外周靜脈血，制備血小板膜，測定PBRs結合活力。 (2)癲癇敏感性實驗

4、：雄性大鼠注射驚厥劑量(8mg·kg-1)海人酸(KA)，7d后再次注射KA(4mg·kg-1)后，根據癲癇發(fā)作與否分為癲癇敏感性形成組和未形成組。另設單一閾下劑量組和對照組。動物斷頭后制備大腦皮質線粒體和海馬突觸體，測定PBRs結合活力。 (3)托吡酯(TPM)干擾實驗：雄性大鼠分為對照組、KA點燃組、TPM1組(10mg·kg-1·d-1)和TPM2組(30mg·kg-1·d-1)。動物注射KA(10mg·kg-1)3周末，

5、藥物治療的動物連續(xù)注射TPM7d；4周末注射KA(5mg·kg-1)后，觀察癲癇發(fā)作行為，斷頭制備海馬突觸體，測定PBRs結合活力。 結果1.隨著鼠齡增加，大腦皮質線粒體、海馬突觸體、垂體細胞以及血小板PBRs結合活性顯著下降。血小板PBRs結合活性與皮質線粒體、海馬突觸體、垂體細胞PBRs結合活性間均具有顯著相關性(P＜0.001)。 2.與溶媒對照組比較，藥物治療組衰老模型動物Bmax顯著升高，KD無顯著變化，動物學

6、習記憶能力顯著改善。大腦皮質線粒體、海馬突觸體PBRs特異結合活性與迷宮試驗動物逃避潛伏期、平臺象限游泳距離和時間顯著相關(P＜0.001)。 3.難治性癲癇患者組血小板膜PBRs結合活性顯著高于健康獻血者。 4.癲癇敏感性形成組大腦皮質線粒體、海馬突觸體PBRs結合活性顯著高于其他3組，并且與動物癲癇發(fā)作潛伏期、最大強度具有顯著相關性。 5.托吡酯(10、30mg·kg-1)可劑量依賴性減弱大鼠癲癇敏感性，降低

7、海馬突觸體PBRs特異結合量。 結論1.大腦皮質線粒體、海馬突觸體、腦垂體細胞PBRs結合活性呈現增齡下降改變，血小板PBRs結合活性能夠反映上述指標的變化。皮質線粒體、海馬突觸體PBRs表達量與衰老動物學習記憶功能密切相關。DHEA可以增加腦組織PBRs的表達量，并改善衰老動物智能狀態(tài)。 2.腦組織PBRs改變與KA點燃大鼠癲癇敏感性形成有關，TPM能夠降低KA點燃大鼠癲癇敏感性，機制與降低海馬突觸體PBRs特異結合量