利用RNA干擾技術(shù)抑制人大腸癌RKO細(xì)胞系葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁
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1、[目的]：構(gòu)建GRP78靶向shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體(PGPU6/GFP/Neo-GRP78，shRNA-GRP78)，觀察其對(duì)人大腸癌RKO細(xì)胞系GRP78基因表達(dá)及對(duì)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、凋亡生物學(xué)行為的影響。
　　 [方法]：使用脂質(zhì)體Lipofectamine2000將GRP78靶向shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體( shRNA-GRP78)轉(zhuǎn)入人大腸癌RKO細(xì)胞系內(nèi)，經(jīng)G418篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的陽性細(xì)胞。分別通過熒光定量PCR和Weste

2、rn-blotting技術(shù)檢測(cè)RKO細(xì)胞系中GRP78在mRNA和蛋白水平上的表達(dá)變化，挑選出表達(dá)抑制最強(qiáng)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。通過xCELLigence系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞的增值、遷移能力；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化情況。
　　 [結(jié)果]：GRP78靶向shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體(shRNA-GRP78)可以顯著下調(diào)GRP78mRNA及蛋白表達(dá)水平(P<0.05); GRP78基因的表達(dá)下調(diào)顯著抑制RKO細(xì)胞的體外增殖，并顯著增加RKO細(xì)胞的

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