Rac1介導(dǎo)GGT對(duì)腦膠質(zhì)瘤增殖和凋亡作用的研究.pdf

1、目的：探討GGT對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制。
　　方法：1、運(yùn)用Western blot檢測(cè)非腫瘤腦組織及不同級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中GGT特異性β亞基的蛋白水平，分析其與腦膠質(zhì)瘤發(fā)生的相關(guān)性。2、在U251細(xì)胞中用小干擾下調(diào)GGT-β表達(dá)后，分別用CCK8法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GGT對(duì)細(xì)胞增殖與凋亡的影響。3、過表達(dá)GGT-β后用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。4、用小干擾下調(diào)GGT-β后，分離細(xì)胞漿與細(xì)胞膜組份，應(yīng)用Western

2、blot檢測(cè)小G蛋白R(shí)acl，RhoA的膜轉(zhuǎn)位情況；應(yīng)用GST-pulldown檢測(cè)活性形式的Racl的水平變化，明確GGT對(duì)Racl，RhoA的調(diào)節(jié)作用。5、在U251細(xì)胞中過表達(dá)GGT底物Racl或RhoA后，檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。6、GGT-β與Racl野生型及不能被GGT修飾的突變體質(zhì)粒共轉(zhuǎn)后，檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，明確GGT作用的機(jī)制。
　　結(jié)果：1、在人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本中，GGT-β水平明顯高于非腫瘤腦組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

3、P<0.01)。2、下調(diào)GGT-β表達(dá)48小時(shí)后，U251細(xì)胞增殖明顯受到抑制，凋亡增加；GGT特異性抑制劑(GGTi-2147)同樣抑制U251細(xì)胞的增殖。3、過表達(dá)GGT-β促進(jìn)U251細(xì)胞增殖(P<0.05)。4、下調(diào)GGT-β表達(dá)后，細(xì)胞膜上Racl，RhoA的水平降低，活性形式的Racl水平減少(P<0.01)。5、U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染Racl，RhoA后可以促進(jìn)細(xì)胞增殖。6、共轉(zhuǎn)GGT-β與Racl野生型質(zhì)粒后細(xì)胞增殖更加明顯，