HIF-1α介導GGT對腦膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲作用的研究.pdf

1、目的：研究Geranylgeranyltransferase(GGT)對腦膠質(zhì)瘤U251細胞遷移和侵襲的影響，并探討其作用機制，為膠質(zhì)瘤的基因治療提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：1.分別應用細胞劃痕實驗和Transwell侵襲實驗檢測腦膠質(zhì)瘤U251細胞遷移和侵襲能力。2.明膠酶譜實驗檢測腦膠質(zhì)瘤U251細胞中MMP-2活性表達。3.Western Blot檢測低氧條件培養(yǎng)0，6h，12h，24h，48h后腦膠質(zhì)瘤U251細胞中H

2、IF-1α蛋白表達。4.設計并合成針對人HIF-1α基因和GGTβ基因的siRNA oligo，通過WB檢測干擾效果，并檢測GGTβ同源家族FTα和FTβ蛋白表達來驗證GGTβsiRNA的特異性。5.采用GGT-298抑制GGTβ活性或用siRNA下調(diào)GGTβ表達后，WB檢測HIF-1α蛋白表達情況；并用siRNA下調(diào)HIF-1α表達后，檢測GGTβ蛋白表達情況。
　　結(jié)果：1.低氧培養(yǎng)6h，12h，24h，48h后人腦膠質(zhì)瘤U2

3、51細胞中HIF-1α蛋白表達較常氧條件下增多，提示低氧模型構(gòu)建成功。2.與常氧條件相比，低氧促進腦膠質(zhì)瘤U251細胞的遷移和侵襲，且上調(diào)MMP-2的活性。3.與陰性對照相比，用siRNA下調(diào)HIF-1α和GGTβ的表達均可抑制人腦膠質(zhì)瘤U251細胞遷移、侵襲和MMP-2的活性。4.應用siRNA下調(diào)GGTβ后，F(xiàn)Tα和FTβ蛋白表達均無變化，提示構(gòu)建的GGTβ siRNA具有特異性。5.應用GGT-298抑制GGT活性或用siRNA下