YB1介導(dǎo)GOLPH3對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲作用的研究.pdf

1、目的：研究Golgi phosphoprotein3(GOLPH3)對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：1.Western blot檢測(cè)GOLPH3和YB1蛋白在非瘤腦組織與各級(jí)別膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中表達(dá)情況，了解GOLPH3和YB1與腦膠質(zhì)瘤發(fā)生的相關(guān)性及兩蛋白間的相關(guān)性;2.分別應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)GOLPH3對(duì)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響;3.Western

2、 blot檢測(cè)下調(diào)或過(guò)表達(dá)GOLPH3后，GOLPH3和YB1在膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中的水平，了解GOLPH3對(duì)YB1的調(diào)節(jié)作用;4.采用Rapamycin和INK128抑制mTOR活性后，Western blot檢測(cè)GOLPH3和YB1在膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中的水平，明確YB1是否處于mTOR的下游;5.Western blot檢測(cè)過(guò)表達(dá)GOLPH3并抑制mTOR活性后，GOLPH3和YB1在膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中的水平，明確抑制mTOR活

3、性是否能取消GOLPH3的作用;6.用siRNA下調(diào)YB1，檢測(cè)其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲遷移作用，明確是否與抑制mTOR活性以及下調(diào)GOLPH3的作用類(lèi)似，并用明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MMP-2活性。
　　結(jié)果：1.GOLPH3和YB1蛋白在非瘤腦組織與各級(jí)別膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中均有表達(dá)，但腦膠質(zhì)瘤GOLPH3和YB1蛋白水平明顯高于非腫瘤腦組織，并且其水平隨著膠質(zhì)瘤惡性級(jí)別的升高而升高;兩蛋白之間存在顯著相關(guān)性;2.與陰性對(duì)照組相比，下調(diào)GOL

4、PH3后抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲;過(guò)表達(dá)GOLPH3可促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移、侵襲;3.與陰性對(duì)照組相比，下調(diào)GOLPH3抑制YB1的表達(dá);過(guò)表達(dá)GOLPH3促進(jìn)YB1的表達(dá);4.與陰性對(duì)照組相比，應(yīng)用INK128抑制mTOR活性后，抑制腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的遷移和侵襲，且下調(diào)YB1的表達(dá)。而應(yīng)用Rapamycin抑制mTOR活性后，無(wú)明顯變化;5.與對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)GOLPH3可增加U251細(xì)胞遷移和侵襲能力，而應(yīng)用INK128