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文檔簡介
1、目的：檢測GOLPH3(Golgi phosphoprotein3)對膠質(zhì)瘤細胞周期的影響；探討GOLPH3調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞周期的作用機制。
方法：利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法在U251細胞系中利用siRNA技術(shù)下調(diào)GOLPH3的表達后，檢測以下指標(biāo)：1.通過Western blot法檢測siRNA對GOLPH3蛋白水平的干擾效果。2.采用用流式細胞術(shù)檢測下調(diào)GOLPH3對U251細胞周期的影響。3.通過RT-PCR和Western blo
2、t法檢測下調(diào)GOLPH3表達對G0/G1期細胞周期相關(guān)蛋白cyclinD1，p21wafl/cip(p21)和p53在核酸和蛋白水的影響。4.采用Western blot法檢測下調(diào)GOLPH3對Akt、pAkt在蛋白水平的影響。
結(jié)果：在U251細胞系中，GOLPH3-siRNAs均能夠使GOLPH3蛋白水平表達下調(diào)(P<0.05)。2.下調(diào)GOLPH3表達能使細胞周期阻滯在G0/G1期(P<0.05)。3.下調(diào)GOLPH3表
3、達能夠使cyclinD1的核酸和蛋白水平降低，p21的核酸和蛋白水平升高而p53的核酸和蛋白水平無明顯變化。4.下調(diào)GOLPH3的表達能夠降低pAkt的蛋白水平降低(P<0.05)，但對Akt無影響。
結(jié)論：1.在U251細胞系中下調(diào)GOLPH3的表達能夠通過下調(diào)cyclinD1和上調(diào)p21的表達使細胞阻滯在G0/G1期。2.在U251細胞系中GOLPH3對p21的調(diào)節(jié)是不依賴p53方式。3.在U251細胞系中GOLPH3對周
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