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文檔簡(jiǎn)介
1、神經(jīng)膠質(zhì)瘤(gliomas)是顱腦最常見的腫瘤,在我國占顱腦腫瘤的35.26%-60.96%,居顱腦惡性腫瘤的第一位。腦膠質(zhì)瘤具有廣泛的侵襲性,由低級(jí)別向高級(jí)別進(jìn)展的特性,以及高復(fù)發(fā)率、高致殘率、高死亡率特點(diǎn),給人類健康造成了極大危害。目前,治療腦膠質(zhì)瘤的主要手段是手術(shù)切除配合放、化療,盡管如此,惡性腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后中位生存期尚不足兩年。紫杉醇(Paclitaxel,PTX)作為臨床化學(xué)治療腫瘤的一類生物堿類藥物,已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于乳腺癌
2、、卵巢癌、腦腫瘤等腫瘤的化學(xué)治療,其獨(dú)特的抗癌機(jī)制引起了許多專家學(xué)者的關(guān)注,并且有望成作為腦膠質(zhì)瘤的化學(xué)治療藥物或放射增敏劑。
目的:
本研究旨在探討PTX對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖抑制的相關(guān)機(jī)制,為其在神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
方法:
1.篩選細(xì)胞:初步定為神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U373,并準(zhǔn)備相關(guān)實(shí)驗(yàn)試劑及材料,閱讀相關(guān)實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)并學(xué)習(xí)熟悉其中需要用到多種方法及原理。
2.細(xì)胞培養(yǎng):培養(yǎng)
3、生長(zhǎng)狀況良好的細(xì)胞,熟悉U373細(xì)胞的生長(zhǎng)周期,了解細(xì)胞的形狀及特征。
3.MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性,測(cè)定細(xì)胞的增殖抑制率,并以此將實(shí)驗(yàn)分組,進(jìn)行以下各實(shí)驗(yàn)。
4.流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定不同實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞周期分布情況。
5.應(yīng)用免疫熒光化學(xué)方法在熒光顯微鏡下觀察不同實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。
6.提取各組細(xì)胞RNA,反轉(zhuǎn)錄cDNA并擴(kuò)增細(xì)胞周期基因DNA,然后應(yīng)用凝膠電泳法檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組RNA水平的變化。
4、 7。提取各組細(xì)胞蛋白,應(yīng)用WesternBlotting方法檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)水平變化。
8.應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件(SPSS11.0)給予統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)處理。
結(jié)果:
1.PTX可以明顯抑制U373細(xì)胞的增殖活性,抑制作用呈時(shí)間濃度依賴性。
2.細(xì)胞周期分析顯示,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞G2/M期比例增高,且呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。
3.細(xì)胞免疫熒光顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞被阻滯于有絲分裂期,增加了微管的穩(wěn)定性,
5、使微管解聚障礙。
4.RT-PCR法顯示,PTX可增加CDK1和CyclinB1相關(guān)RNA水平的表達(dá),降低CyclinD1相關(guān)RNA水平的表達(dá),而對(duì)CDK2相關(guān)RNA則影響不大。
5.WesternBlotting法顯示,PTX可增加CDK1和CyclinB1相關(guān)蛋白水平的表達(dá),降低CyclinD1相關(guān)蛋白水平的表達(dá),而對(duì)CDK2相關(guān)蛋白則影響不大。
結(jié)論:
PTX能夠抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞增
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