GOLPH3、NDRG1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡、增殖相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分：GOLPH3、NDRG1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及相關(guān)性的研究
　　目的：
　　高爾基體磷蛋白3 (GOLPH3:Golgi phosphoprotein 3)被認(rèn)為是外殼蛋白(coat proteins)的一種，NDRG1(N-myc downstream regulated gene 1)于1997年第一次被分離，在人體正常組織及腫瘤中均存在表達(dá)，且同時(shí)也被發(fā)現(xiàn)參與了胚胎發(fā)生

2、發(fā)育、細(xì)胞生長(zhǎng)分化、脂質(zhì)合成、髓鞘形成、應(yīng)激反應(yīng)和免疫功能等多個(gè)過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)研究GOLPH3、NDRG1分別在正常腦組織和人腦膠質(zhì)瘤組織不同病理級(jí)別中的表達(dá)，并對(duì)其表達(dá)情況與膠質(zhì)瘤病理級(jí)別的關(guān)系進(jìn)行研究。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)分為正常腦組織組、膠質(zhì)瘤Ⅱ級(jí)組、Ⅲ級(jí)組和Ⅳ級(jí)組，正常腦組織來(lái)自于腦外傷患者需要行顱內(nèi)減壓手術(shù)而取得的非壞死的正常腦組織標(biāo)本。應(yīng)用Real-time RT-PCR法和Western Blot法檢測(cè)34例

3、人腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本和9例正常腦組織中的GOLPH3和NDRG1的mRNA和蛋白水平，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)9例正常腦組織標(biāo)本和76例人腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中的GOLPH3和NDRG1表達(dá)情況，并分析兩種基因表達(dá)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.在人腦膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中，GOLPH3和NDRG1在mRNA水平和蛋白水平均有表達(dá)。在人腦膠質(zhì)瘤中，GOLPH3的mRNA和蛋白的表達(dá)水平均高于正常腦組織，且與正常腦組

4、織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，并隨著膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別的增高而增加。而NDRG1的mRNA和蛋白表達(dá)量在正常腦組織中表達(dá)較低，在人腦膠質(zhì)瘤Ⅱ級(jí)組中最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，在膠質(zhì)瘤組織中，隨著病理級(jí)別的升高，NDRG1的mRNA和蛋白表達(dá)水平逐漸降低。NDRG1的mRNA和蛋白在正常腦組織組和Ⅲ級(jí)組、Ⅳ級(jí)組中的表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在膠質(zhì)瘤組織中，GOLPH3和NDRG1在mRNA水平和蛋白水平

5、的表達(dá)趨勢(shì)相反。
　　2.GOLPH3的免疫組化結(jié)果顯示，GOLPH3的陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞核旁，相當(dāng)于高爾基體位置，呈粗大顆粒狀，部分染色為細(xì)小顆粒狀，著色彌散存在于細(xì)胞質(zhì)中。GOLPH3在正常腦組織組和膠質(zhì)瘤組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為22.2％(2/9)、57.9％(44/76)，兩者比較(x=4.124，P＜0.05);Ⅱ級(jí)組39.1％(9/23)，Ⅲ級(jí)組54.2％(13/24)，Ⅳ級(jí)組75.9％(20/29)。這說(shuō)明GO

6、LPH3蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在膠質(zhì)瘤組織中高于正常腦組織，且隨病理級(jí)別增高而升高。
　　NDRG1的免疫組化結(jié)果顯示，NDRG1的陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，也有部分表達(dá)在細(xì)胞膜或細(xì)胞的連接部位。NDRG1在正常腦組織組和膠質(zhì)瘤組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為44.4％(4/9)、46.1％(35/76)，兩者比較(x=0.008，P＞0.05);Ⅱ級(jí)組60.9％(14/23)，Ⅲ級(jí)組，41.7％(10/24)，Ⅳ級(jí)組20.6％(7/29)。在

7、腦膠質(zhì)瘤組織中，NDRG1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率隨病理級(jí)別增高呈降低的趨勢(shì)。
　　NDRG1和GOLPH3的免疫組化陽(yáng)性率情況和Western-Blot檢測(cè)的蛋白表達(dá)趨勢(shì)是一致的。
　　結(jié)論：
　　1、GOLPH3和NDRG1在正常腦組織和膠質(zhì)瘤組織中均有表達(dá)。在膠質(zhì)瘤組織中，GOLPH3的表達(dá)隨著腫瘤組織病理級(jí)別的升高逐漸升高，而NDRG1的表達(dá)隨著腫瘤組織病理級(jí)別的升高逐漸減低。
　　2、GOLPH3和NDRG1在膠

8、質(zhì)瘤中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
　　第二部分：GOLPH3和NDRG1對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡及相關(guān)機(jī)制的研究
　　目的：
　　探討GOLPH3和NDRG1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡、增殖的影響及兩者之間的關(guān)系、可能機(jī)制，為膠質(zhì)瘤治療提供潛在的基因治療分子靶點(diǎn)。
　　方法：
　　1.在膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251及U87中，用lipofectamine2000轉(zhuǎn)染GOLPH3或NDRG1的siRNA，用Polyjet轉(zhuǎn)染GOLPH3或

9、NDRG1的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒。
　　2.運(yùn)用Westem Blot檢測(cè)其蛋白表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GOLPH3 siRNA、NDRG1siRNA、GOLPH3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及NDRG1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒對(duì)U87、U251細(xì)胞凋亡的影響;CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。
　　結(jié)果：
　　1.下調(diào)GOLPH3或過(guò)表達(dá)NDRG1后，膠質(zhì)瘤U251、U87細(xì)胞的凋亡增多，增殖能力下降，過(guò)表達(dá)GOLPH3或下調(diào)NDRG1后，膠質(zhì)瘤U251、U87

10、細(xì)胞的凋亡減少，增殖能力升高。
　　2.在膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞系中下調(diào)GOLPH3后，NDRG1、cleaved-caspase3的蛋白表達(dá)水平明顯增加，過(guò)表達(dá)GOLPH3后，NDRG1、cleaved-caspase3的蛋白表達(dá)水平明顯減少。
　　3.在膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞系中下調(diào)NDRG1，GOLPH3的蛋白表達(dá)水平變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，cleaved-caspase3的蛋白表達(dá)水平減少。
　　結(jié)論：
　　1.下調(diào)G