黃芩素促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬和凋亡及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、分類號： R329 密級：公開 UDC： 576 學(xué)校代碼：11065 碩士學(xué)位論文 黃芩素促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬和凋亡及相關(guān)機(jī)制研究 丁玲玲 指 導(dǎo) 教 師 于向民（教授） 學(xué)科專業(yè)名稱 細(xì)胞生物學(xué) 論文答辯日期 2017 年 5 月 21 日Ⅱ 結(jié)果 結(jié)

2、果： 1. 將 Ad-mCherry-GFP-LC3B 腺病毒轉(zhuǎn)染入 U251 細(xì)胞中，隨著 BAI 藥物作用時間的增加，Ad-mCherry-GFP-LC3B 呈現(xiàn)彌散的黃色熒光——斑點狀的黃色熒光——斑點狀的紅色熒光，表明了 BAI 作用后 LC3 蛋白的變化過程。 2. Western blot 顯示 LC3 蛋白的表達(dá)隨著 BAI 濃度和處理時間的增加逐漸增加；加入 CQ 后 LC3 蛋白的表達(dá)增加；免疫熒光檢測 LC3 蛋白，

3、驗證了這個結(jié)果。 3. DAPI 染色觀察發(fā)現(xiàn) 24 h 時細(xì)胞核發(fā)生碎裂， 隨著時間的增加碎裂情況加??； JC-1染色觀察發(fā)現(xiàn)24 h時細(xì)胞中線粒體膜電位發(fā)生變化， 而且具有時間依賴性； western blot 檢測顯示，cleaved caspase-3 蛋白表達(dá)量與 BAI 作用時間和 BAI 濃度呈正相關(guān)。 4. Western blot 檢測 p-AMPK 蛋白發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在發(fā)生自噬的同時 p-AMPK 蛋白含量也增加；加入 c

4、ompound C 后細(xì)胞生長受到抑制，不僅 p-AMPK 蛋白表達(dá)水平下降，LC3 和 cleaved caspase-3 蛋白水平也呈下降趨勢；另外 DAPI 和 JC-1 染色顯示凋亡情況也得到了緩解。 5. CCK-8 結(jié)果顯示 BAI 和 TMZ 單獨(dú)用藥 U251 細(xì)胞隨著藥物濃度和作用時間的增加細(xì)胞活力下降；TMZ 和 BAI 聯(lián)合用藥后則隨著 TMZ 濃度的增加和作用時間的延長，細(xì)胞活力出現(xiàn)明顯的下降。 結(jié)論： 結(jié)論：