p33ING1b在細(xì)胞衰老過程中的異常表達(dá)及其對DNA損傷修復(fù)和凋亡的影響.pdf

1、目的:p33ING1b是1996年被發(fā)現(xiàn)的,它具有多種生物學(xué)功能,在細(xì)胞生長的負(fù)調(diào)控、增殖、衰老、腫瘤的錨著依賴性生長、凋亡及細(xì)胞周期調(diào)控點(diǎn)的調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮作用.該試驗(yàn)的目的是要了解p33ING1b在衰老和年輕細(xì)胞中的表達(dá)情況,以及它在衰老和年輕細(xì)胞中發(fā)揮DNA損傷修復(fù)和促進(jìn)凋亡的功能的差異.方法:(1)克隆了p33ING1b 5'端調(diào)控區(qū),并構(gòu)建了熒光素酶報告基因的載體pGL3-Basic-1.在此基礎(chǔ)上構(gòu)建其5'端缺失體,轉(zhuǎn)染人胚肺

2、二倍體成纖維細(xì)胞,觀察在年輕細(xì)胞和衰老細(xì)胞中的表達(dá)情況.(2)通過RT-PCR分析p33ING1b、p47ING1a和p24ING1c在年輕細(xì)胞、衰老細(xì)胞、H<,2>O<,2>處理的早衰細(xì)胞、靜止期細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞Lovo和HEPG2中的表達(dá)情況.(3)克隆了p33ING1b蛋白質(zhì)編碼序列,并構(gòu)建了腺病毒表達(dá)載體Adeno-33.將Adeno-33與經(jīng)過紫外線照射的pRL-CMV共轉(zhuǎn)染年輕和衰老HDF細(xì)胞,觀察對帶有海腎熒光素酶報告基因的

3、DNA損傷修復(fù)的作用.通過單細(xì)胞電泳觀察了對細(xì)胞內(nèi)基因組DNA損傷修復(fù)的作用.(4)將Adeno-33轉(zhuǎn)入年輕和衰老HDF細(xì)胞中,觀察對H<,2>O<,2>損傷后細(xì)胞凋亡的作用.結(jié)論:p33ING1b的啟動子在年輕細(xì)胞中的活性高于衰老細(xì)胞,它在年輕細(xì)胞中的表達(dá)量高于衰老細(xì)胞,是由于在調(diào)控序列49~336bp之間存在一個轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件.p24ING1c、p33ING1b和p47ING1a在不同的細(xì)胞內(nèi)表達(dá)量是有差異的,他們在年輕細(xì)胞中的表達(dá)