PLCE1在胃癌組織中的表達(dá)及其對(duì)胃癌細(xì)胞周期和凋亡的影響.pdf

1、第一部分PLCE1在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義
　　目的:檢測(cè)磷脂酶Cε1(PLCE1)在胃癌、癌旁正常組織中的表達(dá)情況。通過分析患者的臨床病理資料,揭示PLCE1在胃癌組織中的表達(dá)及其與患者臨床病理資料之間的關(guān)系。
　　方法:收取2010年到2011年期間的胃癌組織標(biāo)本97例與其對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織97例。采用免疫組化的方法檢測(cè)組織中PLCE1蛋白的表達(dá),通過RealTimePCR檢測(cè)組織中PLCE1的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

2、然后,結(jié)合患者的臨床病理資料,分析PLCE1的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。
　　結(jié)果:免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PLCE1在腫瘤組織的高表達(dá)率為87.63％,明顯高于正常組織的28.87%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),PLCE1的高表達(dá)與腫瘤浸潤深度(P<0.05)、分化程度(P<0.05)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)及TNM分期(P<0.05)呈正相關(guān);RealTimePCR檢測(cè)胃癌組織中PLCE1的mRNA相對(duì)表

3、達(dá)量,也明顯高于其相對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織。
　　結(jié)論:PLCE1在胃癌組織中呈明顯高表達(dá)狀態(tài),而且其表達(dá)水平隨著腫瘤的惡性程度增加而升高。因此,PLCE1基因可能作為癌基因參與了胃癌的發(fā)生和發(fā)展
　　第二部分下調(diào)PLCE1的表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞周期和凋亡的影響
　　目的:研究PLCE1表達(dá)下調(diào)時(shí),對(duì)胃癌細(xì)胞周期和凋亡的影響,并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行研究。
　　方法:用PLCE1特異性的siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞系SGC7901,48小

4、時(shí)后,采用流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡的情況,通過RealTimePCR分別檢測(cè)與細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)的基因cyclinD1、p53和p21的表達(dá),與凋亡相關(guān)基因Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bcl-xL和Bax的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:用PLCE1特異性的siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞48小時(shí)后,細(xì)胞周期分布如下:(1)空白對(duì)照組G0/G1期:49.12±2.25%,G2/M期:19.25±1.52%,S期:31.6

5、5±1.22%;(2)陰性對(duì)照組G0/G1期:50.24±2.47%,G2/M期:19.70±0.43%,S期:30.14±0.98%;(3)siRNA-1組G0/G1期:64.82±3.86%,G2/M期:10.76±0.34%,S期:24.86±1.56%;(4)siRNA-2組G0/G1期:67.17±3.31%,G2/M期:10.32±0.37%,S期:22.83±1.29%;兩組實(shí)驗(yàn)組與空白和陰性對(duì)照組相比,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、。這說明當(dāng)PLCE1表達(dá)下調(diào)時(shí)能夠使細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期。通過RealTimePCR進(jìn)一步檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)基因,結(jié)果發(fā)現(xiàn)下調(diào)PLCE1的表達(dá)能夠下調(diào)cyclinD1的表達(dá),而上調(diào)p21和p53的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中,當(dāng)PLCE1表達(dá)下調(diào)時(shí),實(shí)驗(yàn)組的胃癌細(xì)胞凋亡率要明顯高于空白和陰性對(duì)照組。通過RealTimePCR進(jìn)一步檢測(cè)調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,結(jié)果發(fā)現(xiàn)下調(diào)PLCE1的表達(dá)能夠下調(diào)Bcl-xL的表達(dá),而上調(diào)