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文檔簡介
1、目的:異氟醚是臨床常用的鹵族吸入麻醉藥,越來越多的研究證實其具有神經毒性作用,可以導致術后認知功能障礙,特別是存在神經退行性變的老年人更易發(fā)生。阿爾茨海默病(AD)是一種常見的神經退行性疾病,淀粉樣前體蛋白(APP)基因的錯義突變與AD的發(fā)生直接有關,研究表明,轉染APP基因的細胞對異氟醚的神經毒性敏感性增強。我們前期研究表明異氟醚可以引起細胞損傷,其機制與細胞內的鈣穩(wěn)態(tài)失衡有關。細胞內的鈣調節(jié)主要依賴于內質網上的三種鈣離子通道,包括鈣
2、泵(Ca2+ ATPase)、1,4,5-三磷酸肌醇受體(IP3R)及藍尼啶受體(RyR)。內質網通過IP3R受體產生的異常鈣外流,可引起胞漿和線粒體內的鈣超載,進而促進細胞凋亡。本文旨在探討在異氟醚對轉染APP基因SH-SY5Y細胞凋亡的影響以及內質網IP3R在其中的作用。
方法:將轉染APP基因的SH-SY5Y細胞以1.2×104個/cm2密度接種于25 cm2的培養(yǎng)瓶中,采用隨機數字表法,隨機分為4組(n=6):空白對照
3、組(C組)、IP3R拮抗劑組(X組)、異氟醚組(I組)、異氟醚+IP3R拮抗劑組(I+X組)。繼續(xù)培養(yǎng)24 h待細胞貼壁后,C組常規(guī)培養(yǎng);X組和I+X組加入IP3R拮抗劑-Xestospongia C100 nM;30 min后I組和I+X組給予異氟醚處理,濃度維持在1.2%(1MAC),持續(xù)8h。收集細胞,采用透射電鏡觀察細胞的超微結構改變,Annexin V/PI雙染法測定細胞凋亡率(Apoptosis Rate,AR),Four-
4、3/Am測定胞漿Ca2+濃度([Ca2+]i),Westem blot法測定IP3R蛋白表達水平。
結果:與C組比較,X組細胞細胞凋亡率、[Ca2+]i和IP3R蛋白表達差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但I組和I+X組細胞細胞凋亡率增加,[Ca2+]i升高,IP3R蛋白表達上調(P<0.01);與I組比較,I+X組細胞凋亡率和[Ca2+]i降低,IP3R蛋白表達下調(P<0.01)。電鏡結果顯示I組和I+X組細胞出現病理學
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