基于NF-κB與COX-2信號的艷山姜揮發(fā)油對LPS誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、自卡薩尼絲提出“人與動脈同壽”的觀點(diǎn)，血管內(nèi)皮細(xì)胞生理功能與病理的變化成為人類健康研究的熱點(diǎn)之一。大量研究結(jié)果證實(shí)，心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生和發(fā)展與血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷密切相關(guān)，而炎癥反應(yīng)是內(nèi)皮細(xì)胞損傷關(guān)鍵的病理機(jī)制。民族藥艷山姜為姜科山姜屬植物艷山姜Alpiniazerumbet（Pers.)Burtt et Smith的干燥成熟果實(shí)，貴州民間廣泛用于心血管系統(tǒng)疾患的防治。實(shí)驗(yàn)室前期研究證實(shí)，揮發(fā)油（EOFAZ）是其主要藥效部位之一，具有抗炎

2、、改善血管內(nèi)皮功能及氧化應(yīng)激狀態(tài)等藥理作用。
　　目的：研究艷山姜揮發(fā)油（EOFAZ）對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC)損傷的保護(hù)作用，并進(jìn)一步闡明其對NF-κB及COX-2信號的調(diào)控，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)與理論指導(dǎo)。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)以傳代培養(yǎng)4-5代的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞（HAEC，ScienCell）為研究對象。觀察不同濃度EOFAZ（低劑量：50ng/ml；高劑量：100ng/ml）對脂多糖（LPS

3、，1μg/ml）誘導(dǎo)炎癥損傷的保護(hù)作用，同時(shí)選取阿托伐他?。ˋtv，5μM）、阿司匹林（Asp，2mM）作為陽性對照藥。通過MTT法、LDH外露率、Giemsa染色和HE染色判斷HAEC損傷；Tunel染色觀察EOFAZ、Atv、Asp對LPS誘導(dǎo)HAEC凋亡的保護(hù)作用；RT-PCR檢測EOFAZ、Atv、Asp對LPS誘導(dǎo)HAECICAM-1、COX2 mRNA表達(dá)的影響；蛋白免疫印跡法（Western blotting）分析EOFA

4、Z、Atv、Asp對LPS誘導(dǎo)HAEC NF-κB激活及對COX-2表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LPS（1μg/ml）處理12h后OD值明顯下降，而EOFAZ（50ng、100ng）、Atv（5μM）、Asp（2mM）干預(yù)后OD值明顯升高；LDH外露率實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，LPS（1μg/ml）處理12h后，LDH外露率明顯提高，各組藥物干預(yù)后LDH外露率明顯降低；tunel染結(jié)果表明，LPS（1μg/ml）處理12h后t

5、unel染色陽性細(xì)胞數(shù)增加（細(xì)胞核呈黃褐色），蘇木素復(fù)染后藍(lán)紫色細(xì)胞明顯減少，而各組藥物干預(yù)后tunel染色陽性細(xì)胞明顯減少。LPS（1μg/ml）可誘導(dǎo)HAEC ICAM-1、COX2 mRNA及蛋白表達(dá)上調(diào)；NF-κB p65磷酸化增加、IκBα降解增多。EOFAZ（50ng、100ng）、Atv（5μM）、Asp（2mM）對LPS誘導(dǎo)的HAEC損傷具有不同程度的保護(hù)作用：①各組藥物干預(yù)后細(xì)胞活力增加、凋亡細(xì)胞減少；②各組藥物干預(yù)后

6、均可抑制ICAM-1 mRNA及蛋白的表達(dá)；③EOFAZ（50ng、100ng）、Asp（2mM）降低COX-2 mRNA及蛋白的表達(dá)；④EOFAZ（50ng、100ng）、Atv（5μM）、Asp（2mM）均抑制 NF-κB激活，穩(wěn)定 IκBα，EOFAZ具有一定的劑量正相關(guān)性。
　　結(jié)論：LPS誘導(dǎo)HAEC損傷與NF-κB及COX-2信號密切相關(guān)；EOFAZ對LPS誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞炎性損傷具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與穩(wěn)定