干預(yù)NF-κB信號通路對劃痕損傷后腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1的影響.pdf

1、[目的]
　　觀察干預(yù)NF-κB信號通路對劃痕損傷后SD大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB活化和NF-κB下游炎癥因子ICAM-Ⅰ的表達(dá)情況。為進(jìn)一步闡明NF-κB在創(chuàng)傷性腦損傷后的作用機(jī)制，尋找調(diào)控創(chuàng)傷性顱腦損傷后腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞繼發(fā)性死亡的新治療靶點，為顱腦損傷的治療提供理論基礎(chǔ)。
　　[方法]
　　取SPF級新生SD大鼠的大腦皮質(zhì)后提取腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。傳代純化滿意后，把細(xì)胞隨機(jī)分成空白組、激活組、抑制組

2、、劃痕組、劃痕+激活組、劃痕+抑制組6組。激活組給予NF-κB激活劑佛波醇脂(PMA)干預(yù)，抑制組在吡咯醛二硫氨基甲酸(PDTC)預(yù)處理后加用PMA，劃痕+激活組和劃痕+抑制組則在劃痕損傷后分別按激活組和抑制組處理。各組細(xì)胞處理1、6、12、24、48 h后，應(yīng)用免疫細(xì)胞熒光法測定磷酸化NF-κB p65的表達(dá)，ELISA法檢測ICAM-Ⅰ的表達(dá)情況。
　　[結(jié)果]
　　1.本實驗成功對腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行了體外培養(yǎng)，經(jīng)免疫

3、熒光法鑒定腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞純度在93％以上。
　　2.隨著作用時間逐漸增加，除空白組外其余各組的NF-κB蛋白表達(dá)量也逐漸增高，以在24 h改變最顯著。激活組在1h，6h，12h，24h，48 h均明顯高于空白組，差異有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。抑制組在1h，6h，12h，24h，48h NF-κB蛋白表達(dá)均較激活組明顯減少，差異有顯著統(tǒng)的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。劃痕組、劃痕+激活組和劃痕+抑制組兩兩比較差異有顯著的統(tǒng)

4、計學(xué)意義(P＜0.01)，劃痕+激活組＞劃痕組＞劃痕+抑制組，且劃痕+激活組的峰值提前至12h。
　　3.隨著作用時間逐漸增加，除空白組外其余各組的ICAM-Ⅰ的表達(dá)量均有不同程度的增高。空白組與抑制組、空白與劃痕+抑制組間比較差異間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，其余各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。三個劃痕損傷模型組自6h始兩兩比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。從時間上分析，各組24 h與48 h之間

5、比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，其余各組間不同時間點兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　[結(jié)論]
　　本實驗通過對腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB的表達(dá)進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示:NF-κB通路激活后，早期細(xì)胞ICAM-Ⅰ表達(dá)不明顯，晚期ICAM-Ⅰ大量表達(dá)。PMA誘導(dǎo)的NF-κB活化能夠促進(jìn)正常和劃痕損傷的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-Ⅰ的表達(dá)，而PDTC能夠抑制NF-κB通路而導(dǎo)致ICAM-Ⅰ表達(dá)減少，但又無法完全阻斷