血管內(nèi)皮細(xì)胞中NF-κB靶基因的鑒定.pdf

1、核因子κB(NF-κB)是一類與炎癥和腫瘤相關(guān)的重要轉(zhuǎn)錄因子，普遍存在于體內(nèi)各種類型的細(xì)胞內(nèi)。當(dāng)受到外界刺激時(shí)NF-κB會(huì)被激活，從而調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá)，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、免疫與癌變等過程。血管病變被認(rèn)為是一種炎癥反應(yīng)，與NF-κB信號(hào)通路有密切關(guān)系，研究認(rèn)為NF-κB的激活是動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病發(fā)生發(fā)展的始動(dòng)機(jī)制之一，因此研究NF-κB與心血管疾病的關(guān)系有很重要的意義。
　　本論文以血管內(nèi)皮細(xì)胞作為研究對(duì)象，分別用TNF

2、α誘導(dǎo)及p65 siRNA干擾處理，用基因芯片技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在血管內(nèi)皮細(xì)胞的靶基因和靶miRNA進(jìn)行了鑒定，主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用基因芯片技術(shù)檢測(cè)TNFα誘導(dǎo)及p65 siRNA干擾的主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的基因表達(dá)譜。對(duì)樣品進(jìn)行初步的qPCR檢測(cè)后得到處理成功的樣品，之后進(jìn)行基因表達(dá)譜檢測(cè)。篩選得到基因表達(dá)變化倍數(shù)大于1.5倍的61個(gè)上調(diào)和49個(gè)下調(diào)的NF-κB靶基因，對(duì)NF-κB靶基因與相關(guān)疾病進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)9個(gè)靶

3、基因與4種血管相關(guān)疾病關(guān)系密切?；虮倔w論(Gene Ontology，GO)分析發(fā)現(xiàn)，這些靶基因與炎癥、免疫、代謝、刺激應(yīng)答和器官發(fā)育等生物過程有關(guān)。此外，KEGG分析發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞受體(T cell receptor，TCR)和類Toll受體(Toll-like receptors，TLR)通路的活化也可以進(jìn)一步激活NF-κB信號(hào)通路，一個(gè)基因可同時(shí)在幾個(gè)通路發(fā)揮作用。
　　2.采用基因芯片技術(shù)對(duì)TNFα和p65 siRNA處理

4、后主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中NF-κB的靶miRNA進(jìn)行鑒定。篩選后得到表達(dá)變化倍數(shù)大于1.5倍的23個(gè)上調(diào)和6個(gè)下調(diào)的NF-κB的靶miRNA，對(duì)這些NF-κB靶miRNA與相關(guān)疾病進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)10個(gè)miRNA與4種血管相關(guān)疾病關(guān)系密切。綜合近年研究與本論文表達(dá)譜結(jié)果，得到NF-κB與miR-199a、miR-10a和miR-15的3個(gè)調(diào)控回路關(guān)系。對(duì)miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)后與第一部分得到的NF-κB靶基因比較取交集，共有40個(gè)NF-κB靶

5、miRNA的靶基因。GO分析表明這些靶基因多涉及調(diào)控、免疫、生物粘附及細(xì)胞分化等生物過程。分析NF-κB靶miRNA與靶基因的相互調(diào)控關(guān)系，有15個(gè)miRNA參與負(fù)調(diào)控，21個(gè)miRNA參與正調(diào)控。其中過表達(dá)的miR-339-5p可能調(diào)控著Cadm4的下調(diào);Wisp1受到miR-339-5p、miR-10a、miR-107、miR-15b、miR-93和miR-762等幾個(gè)miRNA的負(fù)調(diào)控。Dkk2和Syne1受到miR-10a的正調(diào)