AT2R+細(xì)胞在大鼠缺血—再灌注腦組織中表達(dá)的變化.pdf

1、目的:應(yīng)用大鼠大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)腦缺血-再灌注模型，免疫組織化學(xué)法觀察在再灌注的不同時間點缺血-再灌注組織中AT2R細(xì)胞的動態(tài)表達(dá)變化，探討AT2R與缺血-再灌注腦損傷的關(guān)系。
　　方法:選取體重220-250g的健康SD(Sprague-Dawley)雄性成年大鼠42只，按隨機(jī)原則分為假手術(shù)組和再灌注模型組，模型組分為再灌注1天、3天、5天、7天、10天和

2、14天組6個亞組，每組6只。遵照Zea-Longa線栓法制作大鼠短暫性缺血(MCAO)模型，假手術(shù)組僅對相應(yīng)動脈進(jìn)行暴露，不插入線栓。Longa5分制評分法評分為1-3分的大鼠可認(rèn)定為造模成功，記錄分?jǐn)?shù)，納入實驗。分別對達(dá)到限定時間點的大鼠進(jìn)行灌注取腦（假手術(shù)組為術(shù)后24h）。由腦前極為起始每2mm進(jìn)行冠狀切片，分別進(jìn)行如下處理:1.TTC(2，3，5-Triphenyl tetrazalium chloride)染色觀察缺血-再灌注腦

3、損傷情況;2.蘇木精-伊紅(Hematoxylin-eosin，HE)染色法觀察缺血-再灌注腦損傷后腦組織的病理變化;3.免疫組織化學(xué)染色顯色觀察AT2R+細(xì)胞的時間及空間表達(dá)變化，在200倍光鏡下對每張切片缺血區(qū)域（主要為腦皮質(zhì)）進(jìn)行觀察，再對已被染色為棕黃色的AT2R+細(xì)胞，進(jìn)行拍照及統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠腦梗死情況的觀察:TTC染色后，假手術(shù)組未見白色梗死灶，呈紅色;模型組與假手術(shù)組比較，右側(cè)大腦有明顯

4、白色梗死灶形成，符合大腦中動脈供血區(qū)域。
　　2.缺血-再灌注腦組織病理學(xué)觀察:假手術(shù)組為正常腦組織，細(xì)胞具有正常的形態(tài)結(jié)構(gòu)，排列層次分明，無細(xì)胞間質(zhì)水腫表現(xiàn)。模型組在缺血-再灌注3天時發(fā)現(xiàn)缺血皮質(zhì)組織結(jié)構(gòu)紊亂，眾多神經(jīng)元可見水腫、變性;再灌注7天時，正常神經(jīng)元數(shù)量顯著下降，眾多的神經(jīng)元胞質(zhì)胞核界限不清、核固縮、核溶解，亦可見大小不等的空泡。10-14天正常神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量進(jìn)一步減少，空泡數(shù)增多，可見壞死組織軟化。
　　3.AT

5、2R+細(xì)胞在缺血-再灌注腦組織表達(dá)的動態(tài)觀察:假手術(shù)組可見少量AT2R+細(xì)胞，通過對假手術(shù)組各個時間點的分析，AT2R+細(xì)胞數(shù)量無明顯差異。通過對缺血組的切片觀察發(fā)現(xiàn)，在腦缺血-再灌注24小時，缺血皮質(zhì)即可觀察到明顯的AT2R+細(xì)胞表達(dá);再灌注3-5天時可見眾多的AT2R+細(xì)胞彌漫分布于腦皮質(zhì)缺血區(qū)，細(xì)胞形態(tài)多呈類圓形，細(xì)胞大小差異不明顯，在血管周圍可見部分的AT2R+細(xì)胞聚集。隨著再灌注時間的延長，在再灌注7天時AT2R+細(xì)胞數(shù)量最多

6、，表達(dá)部位多向中心壞死區(qū)轉(zhuǎn)移，在再灌注10、14天陽性細(xì)胞數(shù)量略有下降。
　　4.高倍鏡下各組AT2R+細(xì)胞計數(shù):假手術(shù)組為11.2±0.5個/HP;缺血-再灌注24小時為12.8+-3.2個/HP，3天為37.2±2.2個/HP，5天為42.2±2.3個/HP，7天為52.8±3.6個/HP，10天為51.2±4.4個/HP和14天為47.4±2.4個/HP。各個模型組較對照組相比，陽性細(xì)胞數(shù)均顯著增高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0