UCP2大鼠肝缺血預(yù)處理延遲效應(yīng)及缺血再灌注損傷中表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　 通過建立大鼠肝臟缺血預(yù)處理延遲效應(yīng)和肝臟缺血再灌注損傷的動物模型,比較兩組間血清轉(zhuǎn)氨酶的變化情況,并分析解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)在缺血預(yù)處理延遲效應(yīng)及缺血再灌注損傷大鼠肝臟組織中的表達(dá)情況,以探討UCP2在肝臟缺血再灌注損傷中的作用。
　　 材料與方法：
　　 選取Wistar雄性大鼠40只,體重為220～270g,隨機(jī)分為缺血預(yù)處理(IP)組及缺血再灌注損傷(IR)組,每組20只大鼠:①缺血預(yù)處理

2、組,在10％水合氯醛麻醉下行開腹,先夾閉70％肝臟血流10min,恢復(fù)血供后關(guān)腹,72h后再次開腹,與前次夾閉同一部位夾閉肝臟血流30min,恢復(fù)血供后關(guān)腹,分別于30min阻斷前(IP0),再灌注后1h(IP1),6h(IP6)及24h(IP24)4個時點(diǎn)取材,每個時點(diǎn)5只大鼠;②缺血再灌注損傷組,先行開關(guān)腹操作,72h后再次開腹夾閉70％肝臟血流30min,恢復(fù)血供后關(guān)腹,分別于30min阻斷前(IP0),再灌注后1h(IP1),6

3、h(IP6)及24h(IP24)4個時點(diǎn)取材,每個時點(diǎn)5只大鼠。取材時,抽取腹主動脈血,離心后取血清,通過自動生化分析儀檢測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)與谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平;取部分肝組織于4％多聚甲醛中固定,另取部分肝組織于-80℃保存,分別通過免疫組織化學(xué)SABC法及Western Blot法檢測肝組織中UCP2的表達(dá)位置和表達(dá)量的變化情況。
　　 結(jié)果
　　 1、血清轉(zhuǎn)氨酶檢測結(jié)果:30min阻斷前和再灌注后1h

4、,6h及24h,IP組ALT數(shù)值分別為26.0±1.6U/L,222.2±180.1U/L,303.2±179.3U/L,90.8±72.3U/L。AST數(shù)值分別為76.0±8.4U/L,514.0±352.1U/L,810.8±577.9U/L,275.2±178.7±U/L;IR組ALT數(shù)值分別為22.6±3.9U/L,377.8±195.9U/L,993.4±607.5U/L,62.4±58.1.AST數(shù)值分別為60.2±14.3

5、U/L,664.2±202.0U/L,2172.4±1171.0U/L,189.8±103.5U/L。兩組轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)的變化趨勢相同,再灌注后的轉(zhuǎn)氨酶水平較30min阻斷前均有明顯升高,再灌注6h時轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)達(dá)峰值,明顯高于其他各時點(diǎn)(P＜0.05),再灌注24h時基本接近正常水平。兩組間比較,在再灌注6h時,IP組ALT水平明顯低于IR組(P＜0.05),AST水平也有低于IR組的趨勢,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其余時點(diǎn)兩組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

6、r>　　 2、免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示:缺血再灌注后,UCP2的蛋白主要表達(dá)于肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞漿中。
　　 3、Western Blot檢測結(jié)果:30min阻斷前和再灌注后1h,6h及24h,IP組UCP2灰度值比值分別為:0.2358±0.0296,0.3886±0.0127,0.2672±0.0021,0.7829±0.0296;IR組則分別為0.1079±0.0222,0.3565±0.0610,0.3506±0.02

7、60,0.9939±0.0186。兩組間進(jìn)行比較,IP0高于IR0,P＜0.05;IP1與IR1之間無明顯差異;IP6低于IR6,P＜0.05;IP24低于IR24,P＜0.05。同組間進(jìn)行比較,IP1高于IP0,P＜0.05;IP6低于IP1,P＜0.05;IP6與IP0無明顯差異;IP24分別高于IP6和IP1,P＜0.05;IR1高于IR0,P＜0.05;IR6與IR1無明顯差異;IR24分別高于IR6和IR1,P＜0.05。