慢粒間充質(zhì)干細胞在伊馬替尼耐藥中的作用研究.pdf

1、背景:伊馬替尼治療無效的慢性粒細胞白血病(chronic myeloidleukemia，CML)已被歸因于靜默白血病干細胞對伊馬替尼無效。通過保護惡性祖細胞增殖和自我更新的功能，CML的骨髓間充質(zhì)干細胞可能參與了保護白血病細胞的持續(xù)增殖及進展轉(zhuǎn)變。
　　方法:從CML病人獲取骨髓，以密度梯度離心法結(jié)合貼壁分離篩選法提取間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSC);從CML慢性期病人取骨髓，在Ficoll淋

2、巴細胞分離液中離心獲得慢粒單個核細胞;用免疫磁珠法分離CD34+慢粒祖細胞;以流式細胞術(shù)對上述細胞進行特性鑒定。分為CML細胞和間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)及CML細胞單獨培養(yǎng)兩組，分別加入1μM或5μM伊馬替尼，用碘化丙啶染色錨定蛋白Ⅴ雙重染色定量（PI-AnexinⅤ）測定伊馬替尼誘導的細胞凋亡率。同時用Western-blot檢測Bcl-XL蛋白表達水平。用定量遷移實驗評價MSC對原代CML細胞的趨化功能。
　　結(jié)果:
　　1.

3、成功分離出MSC及原代慢粒細胞，所獲取MSC純度＞95％;CD34+細胞純度＞95％。
　　2.伊馬替尼誘導原代CML細胞凋亡具有劑量依賴性，與間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)，CML細胞凋亡率減少。
　　3.與間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)，在伊馬替尼濃度為1μM時，CD34+慢粒細胞凋亡率從41.4±3.2降至25.7±4.8％，CML原代細胞凋亡率從45.7±14.8降低到了15.2±5.9％;在伊馬替尼濃度為5μM時，CD34+CML細胞凋亡

4、率從77.1±6.9降至55.4±5.4％，CML原代細胞凋亡率從58.2±12.1降低到25.3±4.8％。
　　4.Western-blot測定表明，與MSC共培養(yǎng)CML細胞中Bcl-XL的表達水平在1μM伊馬替尼處理后顯著增加，從1.8±0.3％增加至15.9±2.7％。
　　5.MSC上清液對原代CML細胞具有化學誘導活性，11.0±3.5％的原代慢粒細胞移向未稀釋的上清液，遷移也是濃度依賴性的。
　　結(jié)論:C