伊馬替尼聯(lián)合17-AAG逆轉(zhuǎn)伊馬替尼耐藥機(jī)制及藥代動(dòng)力學(xué)的研究.pdf

1、目的:探討伊馬替尼(IM)與烯丙基氨基格爾德霉素(17-AAG)作用于慢性粒細(xì)胞白血病(CML)敏感細(xì)胞株K562和對(duì)伊馬替尼耐藥的同源細(xì)胞株K562A02的增殖抑制、誘導(dǎo)凋亡及其作用機(jī)制的藥效學(xué)研究和考察伊馬替尼在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，比較伊馬替尼聯(lián)合17-AAG與伊馬替尼單獨(dú)給藥時(shí)的藥代動(dòng)力學(xué)差異的藥動(dòng)學(xué)研究。
　　方法:藥效學(xué)研究方法:采用伊馬替尼與17-AAG聯(lián)用或單獨(dú)處理K562和K562A02細(xì)胞，觀察藥物作用細(xì)胞后的

2、凋亡情況。應(yīng)用MTT增殖抑制實(shí)驗(yàn)觀察伊馬替尼和17-AAG對(duì)K562和K562A02細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的影響，AnnexinⅤ流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞率，半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)Bcr-ab1、MDR1、Bcl-2mRNA的表達(dá)及蛋白印跡(Western blot)分析Bcr-ab1、 P-gp、Bcl-2蛋白的表達(dá)。藥動(dòng)學(xué)研究方法:采用一個(gè)劑量組，兩種用藥方案分別單次給藥，用藥方案:伊馬替尼40mg/kg;伊馬替尼40mg

3、/kg聯(lián)合17-AAG15mg/kg;24只SD大鼠分成兩組，每組12只，雌雄各半。灌胃給藥，于不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行眼眶靜脈叢取血。采用反相HPLC法測(cè)定大鼠伊馬替尼血藥濃度，用3p87藥代動(dòng)力學(xué)軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并進(jìn)行臨床藥效評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果:藥效學(xué)結(jié)果:伊馬替尼聯(lián)合17-AAG能有效抑制CML細(xì)胞增殖，0.31μg/ml伊馬替尼和1.25μg/ml17-AAG聯(lián)合作用于K562細(xì)胞48小時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)

4、抑制率達(dá)70％以上，凋亡細(xì)胞比例達(dá)48.7％，顯著高于單藥組（伊馬替尼39.8％，17-AAG26.7％）(P＜0.05)。0.31μg/ml伊馬替尼和1.25μg/ml17-AAG聯(lián)合作用于K562A02細(xì)胞48小時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率僅32.3±1.8％。2.5μg/ml伊馬替尼和10μg/ml17-AAG聯(lián)合作用于K562A02細(xì)胞48小時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率達(dá)66.4±1.7％，凋亡細(xì)胞比例為45％，顯著高于單藥組（伊馬替尼26.6％;

5、17-AAG22.6％）(P＜0.05)。聯(lián)合用藥對(duì)K562細(xì)胞的Bcr-ab1、Bcl-2 mRNA的表達(dá)和Bcr-ab1蛋白、Bcl-2蛋白表達(dá)都有明顯影響。MDR1在K562細(xì)胞中表達(dá)較低，用藥處理后細(xì)胞的MDR1沒(méi)有顯著性變化。聯(lián)合用藥對(duì)K562A02細(xì)胞的Bcr-ab1、MDR1、 Bcl-2mRNA的表達(dá)和Bcr-ab1、MDR1、Bcl-2蛋白表達(dá)都有減少。藥動(dòng)學(xué)結(jié)果:大鼠灌胃給藥后伊馬替尼的藥動(dòng)學(xué)規(guī)律可用一室模型來(lái)描述。

6、伊馬替尼單用的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Ka(1/h)(0.27±0.02)、t1/2(Ka)(h)(2.54±0.13)、T(peak)(5.01±0.16)、C(max)(2.76±0.18)、AUC(39.77±1.33)與伊馬替尼聯(lián)合17-AAG的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Ka(1/h)(0.39±0.1)、t1/2(Ka)(h)(1.88±0.35)、T(peak)(4.31±0.42)、C(max)(3.97±0.69)、AUC(53.58±9.9