B淋巴細(xì)胞刺激因子（BLyS）與實(shí)驗(yàn)性重癥肌無(wú)力動(dòng)物模型的相關(guān)性研究.pdf

1、本文通過(guò)建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力動(dòng)物(experimental autoimmunemvasthenia gravis，EAMG)模型，利用抗BLyS抗體在EAMG模型建立前的預(yù)防和建立后的治療試驗(yàn)，檢測(cè)了抗BLyS抗體在 EAMG中的預(yù)防和治療作用，并初步探索了抗BLyS抗體在 EAMG中的作用機(jī)理。結(jié)果如下： 1實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力(EAMG)動(dòng)物模型的建立與鑒定 用煙堿型乙酰膽堿受體al亞單位125～

2、149多肽片段和鼠傷搴沙門(mén)氏裸菌免疫C57BL／6小鼠，觀(guān)察小鼠的臨床癥狀、抗體滴度、游泳疲勞時(shí)間及肌電圖變化。結(jié)果表明：大部分模型組小鼠強(qiáng)化接種后出現(xiàn)輕微肌無(wú)力癥狀，級(jí)別評(píng)定為1分；模型組小鼠的抗體滴度與正常對(duì)照組小鼠差異顯著，20只模型組小鼠中有12只的抗體滴度為陽(yáng)性；游泳試驗(yàn)中有18只小鼠呈陽(yáng)性；肌電圖檢查中所有小鼠均為陽(yáng)性，最大衰減幅度達(dá)82％。提示：成功建立了EAMG模型，為進(jìn)一步研究EAMG的發(fā)病機(jī)理打下了基礎(chǔ)。 2

3、抗BLyS和BSA多克隆抗體的制備和純化 選取2-3 kg，的雄性日本大耳白兔，分別采用胭淋巴結(jié)免疫法和皮下免疫法免疫兔子，制備抗血清；間接ELISA法檢測(cè)抗血清的效價(jià)：并應(yīng)用分級(jí)飽和硫酸銨鹽析法進(jìn)行純化。結(jié)果表明：獲得抗BLyS多克隆抗體，間接ELISA法檢測(cè)抗血清的效價(jià)為50萬(wàn)倍；獲得抗BSA多克隆抗體，間接ELISA法檢測(cè)抗血清的效價(jià)為5萬(wàn)倍。提示：分別成功制備了抗BLyS和抗BSA多克隆抗體，為進(jìn)一步研究抗BLyS和重癥

4、肌無(wú)力動(dòng)物模型之間的相關(guān)性奠定了基礎(chǔ)。 3抗BLyS抗體對(duì)EAMG的預(yù)防和治療作用研究 建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力動(dòng)物預(yù)防組、預(yù)防對(duì)照組、治療組和治療對(duì)照組，比較四組小鼠的臨床癥狀、抗體滴度、游泳疲勞時(shí)間及肌電圖變化。結(jié)果表明：預(yù)防組小鼠的臨床癥狀評(píng)為0分，抗體滴度80％為陰性，游泳疲勞時(shí)間為陰性，肌電圖衰減均為陰性，與正常組小鼠之間的差異不顯著；治療組臨床癥狀評(píng)為1分，抗體滴度60％為陽(yáng)性，40％為可疑陽(yáng)性，游泳

5、疲勞時(shí)間為陽(yáng)性，肌電圖衰減均為陽(yáng)性，與正常組小鼠之間的差異顯著；預(yù)防對(duì)照組和治療對(duì)照組小鼠的臨床癥狀評(píng)為1分，游泳疲勞時(shí)間和肌電圖衰減均為陽(yáng)性，抗體滴度分別為60％和80％陽(yáng)性，與正常組小鼠之間的差異顯著。提示：抗BLyS多克隆抗體對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力的預(yù)防有較好的效果，而對(duì)其治療效果不明顯。 4抗BLyS抗體在EAMG中作用機(jī)理的初步研究 ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)正常對(duì)照組、EAMG模型組、預(yù)防組、預(yù)防對(duì)照組

6、、治療組、治療對(duì)照組小鼠血清中BLyS的含量；分別用MTT法和堿性磷酸酶法檢測(cè)EAMG小鼠脾臟T、B淋巴細(xì)胞在A(yíng)ChR(A組)、AChR和抗BLVS多抗(B組)、AChR和抗BSA多抗(C組)和ConA或LPS(陽(yáng)性對(duì)照組)刺激下增殖情況。結(jié)果表明：模型組小鼠血清中BLyS含量高于正常對(duì)照組，差異顯著，預(yù)防組低于模型組，接近正常對(duì)照組，與正常對(duì)照組無(wú)差異性，其他三組均高于正常對(duì)照組，差異顯著；T淋巴細(xì)胞體外增殖實(shí)驗(yàn)中，A、B、C組和陽(yáng)性