救必應對產(chǎn)ESBLs大腸桿菌作用效果及藥物代謝動力學研究.pdf

1、本研究旨在探討救必應對產(chǎn)超光譜β內(nèi)酰胺酶(Extended spectrumβ-lactamases，ESBLs)大腸桿菌的抑菌機理及在動物體內(nèi)的藥動學研究，為救必應（鐵冬青、米碎木）的研究和開發(fā)利用提供借鑒。主要研究結(jié)果如下:
　　1、臨床分離菌株的鑒定及基因型檢測:采用雙紙片增效法檢測耐藥菌產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶(Extended spectrumβ-lactmases，ESBLs)情況，并采用PCR擴增法確定細菌產(chǎn)ESBLs基因

2、型。結(jié)果顯示:分離菌為產(chǎn)ESBLs同時攜帶(Fosfomycin Resistance Gene，fosA3)型耐藥基因大腸桿菌。
　　2、救必應水提取物對產(chǎn)ESBLs細菌的抑菌活性研究:用牛津杯法測定救必應水提取物的抑菌活性和平板涂布法測定救必應水提取物的殺菌活性，采用96孔反應板二倍微量稀釋法分別檢測救必應水提取物與抗菌藥的最小抑菌濃度(MIC)，再用微量棋盤稀釋法測定救必應水提取物與抗菌藥聯(lián)合作用后的部分抑菌濃度指數(shù)(FIC

3、I)。結(jié)果顯示:救必應水提取物的MIC為0.5 g/mL，救必應水提取物與阿莫西林、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、痢菌凈、克林沙星、磺胺間甲氧嘧啶、加替沙星、頭孢他啶聯(lián)合應用后FICI≤0.5均存在協(xié)同作用，與左旋氧氟沙星、阿米卡星聯(lián)合應用后0.5＜FICI≤1.0存在相加作用，研究表明救必應水提取物對產(chǎn)ESBLs大腸桿菌有一定的抑菌活性和殺菌活性，其與部分抗菌藥聯(lián)合應用后，抗菌藥體外抗菌活性顯著增強。
　　3、救必應不同提取物與抗菌藥聯(lián)合

4、對產(chǎn)ESBLs細菌的抑菌效果:通過制備4種救必應提取物，采用96孔反應板二倍微量稀釋法體外檢測提取物與抗菌藥聯(lián)合誘導產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的抑菌效果。結(jié)果顯示:4種救必應提取物與抗菌藥聯(lián)合誘導細菌傳代對耐藥大腸桿菌有不同程度的抑菌活性，其中正丁醇、乙醇提取物與抗菌藥聯(lián)合抑菌效果明顯。研究表明救必應正丁醇、乙醇提取物與抗菌藥聯(lián)合誘導細菌傳代具有體外抗耐藥菌作用。
　　4、救必應中藥血清與抗菌藥聯(lián)合對產(chǎn)ESBLs細菌的抑菌效果:制備救必

5、應中藥血清，采用二倍微量稀釋法體外檢測抗菌藥的最小抑菌濃度(MIC)，然后中藥血清與抗菌藥聯(lián)合誘導產(chǎn)ESBLs細菌傳代。結(jié)果顯示:救必應中藥血清與抗菌藥聯(lián)合誘導細菌傳代對產(chǎn)ESBLs大腸桿菌有不同程度的抑菌活性。研究表明救必應中藥血清可明顯地增強β-內(nèi)酰胺類、喹諾酮類、氨基糖苷類和喹噁啉類抗菌藥對耐藥菌的抑制作用。
　　5、救必應水提取物對產(chǎn)ESBLs細菌的抑菌機理研究:通過觀察細菌超微結(jié)構(gòu)、細胞壁和細胞膜通透性變化試驗、核酸合成

6、抑制試驗、蛋白質(zhì)合成抑制試驗、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳試驗，研究救必應水提取物的抑菌機理。結(jié)果顯示:與不添加提取物的對照組相比，救必應水提取物使細菌破損嚴重，細胞壁和細胞膜通透性增加，細胞質(zhì)外滲，菌液中AKP含量、可溶性蛋白含量增多、總蛋白含量下降、菌液中紫外吸收物增加、大腸桿菌DNA熒光強度明顯減弱。研究表明救必應水提取物的抑菌機理是通過影響細菌超微結(jié)構(gòu)，細菌細胞壁和細胞膜通透性的變化，抑制細菌核酸的合成和細菌蛋白質(zhì)的合成實現(xiàn)的。<

7、br>　　6、救必應在動物體內(nèi)的藥物代謝動力學研究:建立雞血漿中紫丁香苷的高效液相色譜法分析方法，對其灌胃給藥在雞體內(nèi)藥動學過程進行研究。結(jié)果顯示紫丁香苷在雞體內(nèi)的血藥濃度，在0.50～30.00μg/mL范圍內(nèi)，濃度對峰面積的線性關(guān)系良好，R2=0.9997。藥動學參數(shù):藥時面積AUC為572.775 h·ug/mL，半衰期t1/2λ為16.75 h，最高血藥濃度Cmax為32.571ug/mL。研究表明紫丁香苷在雞體內(nèi)血藥濃度符合非