ILK在cGVHD狼瘡樣小鼠腎組織中的表達(dá)及氟伐他汀的干預(yù)作用.pdf

1、目的：觀察整合素連接激酶(integrin linked kinase,ILK)在慢性移植物抗宿主病(chronic graft versus host disease,cGVHD)狼瘡樣小鼠腎組織中的表達(dá)情況：研究氟伐他汀是否可通過影響腎組織ILK表達(dá)及減少尿蛋白而改善狼瘡腎炎(lupus nephritis,LN)。 方法:cGVHD狼瘡樣小鼠模型參照有關(guān)文獻(xiàn)建立。按隨機(jī)設(shè)計(jì)原則將模型小鼠分為三組即模型對(duì)照組(A組)、氟伐他

2、汀低劑量干預(yù)組(B組)和氟伐他汀高劑量干預(yù)組(C組),每組各12只小鼠,另取12只同齡雌性(C57BL/6×DBA/2)F1雜交鼠為正常對(duì)照組(D組),各小組內(nèi)分別各取6只小鼠分為第12周組(1組)和16周組(2組),留取24小時(shí)尿,測定尿蛋白排泄量,分別于造模第12周或第16周末處死。HE染色、Masson染色觀察腎組織病理改變。ILK、E-鈣粘蛋白、α-SMA蛋白檢測采用免疫組織化學(xué)方法及Western blot方法,各因子mRNA

3、表達(dá)采用RT-PCR檢測。 結(jié)果： 1)A組、B組及C組小鼠24小時(shí)尿蛋白水平均顯著高于D組小鼠(P<0.01);B組及C組小鼠24小時(shí)尿蛋白水平與A組小鼠相比較顯著降低(P均<0.01),C組小鼠24小時(shí)尿蛋白水平與B組小鼠相比較降低(P<0.05);ABC各組內(nèi)2組小鼠24小時(shí)尿蛋白水平均顯著高于1組小鼠(P<0.01),D組內(nèi)1、2組間小鼠24小時(shí)尿蛋白水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2)腎組織HE染色:A組小鼠系膜區(qū)

4、明顯增寬,基質(zhì)大量增生,部分腎小球可見硬化;腎小管萎縮；可見管型,腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤；B組及C組小鼠上述病變減輕,腎小球細(xì)胞增生減輕,腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤減少,病變減輕。ABC各組內(nèi)2組小鼠病變較1組小鼠加重。 3)腎組織Masson染色:A組小鼠腎小球囊壁,腎小管間質(zhì)有明顯的膠原纖維沉積,B組及C組小鼠膠原纖維較A組減少,主要位于腎小管間質(zhì),ABC各組內(nèi)2組小鼠病膠原沉積較1組小鼠加重。D組小鼠腎組織未見明顯膠原沉積。

5、4)免疫組織化學(xué)檢測:ILK、α-SMA蛋白主要表達(dá)于A、B、C各組小鼠腎小管上皮細(xì)胞,B、C組表達(dá)量低于A組,D組小鼠僅在少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞有微弱表達(dá)；E-鈣粘蛋白在D組小鼠腎組織各類上皮細(xì)胞顯著表達(dá),在A、B、c各組小鼠腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)顯著減少,B、C組表達(dá)量高于A組,C組表達(dá)量高于B組；ABC各組內(nèi)2組小鼠與1組相比E-鈣粘蛋白的蛋白表達(dá)下降(P<0.05),ILK、α-SMA蛋白表達(dá)增加(P<0.05)。染色結(jié)果用IMAGEP

6、ROPLU4s圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析,各組間比較差異有顯著性(P<0.05)。 5)Western blot檢測：與D組比較,A、B、C三組ILK、α-SMA蛋白表達(dá)顯著增加(P<0.05),E-鈣粘蛋白的蛋白表達(dá)顯著減少(P<0.05);B、C組與A組相比E-鈣粘蛋白的蛋白表達(dá)增加(P<0.05),ILK、α-SMA蛋白表達(dá)下降(P<0.05),C組與B組相比E-鈣粘蛋白的蛋白表達(dá)增加(P<0.05),ILK、α-SMA蛋

7、白表達(dá)下降(P<0.05),ABC各組內(nèi)2組小鼠與1組相比E-鈣粘蛋白的蛋白表達(dá)下降(P<0.05),ILK、α-SMA蛋白表達(dá)增加(P<0.05)。ILK與E-鈣粘蛋白的蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.92,P(0.05),與α-SMA蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.93,P<0.05)。 6)半定量RT-PCR檢測:A、B、C三組小鼠腎組織ILK、α-SMA mRNA表達(dá)量均明顯高于D組小鼠p<0.05);B、C組小鼠腎組織ILK、

8、α-SMA mRNA表達(dá)顯著低于A組(p<0.05),C組小鼠腎組織ILK、α-SMA mRNA表達(dá)顯著低于B組。E-鈣粘蛋白mRNA在D組小鼠腎組織中顯著表達(dá),在A、B、C組小鼠腎組織中表達(dá)量顯著下降,與A組相比B、C兩組腎組織中E-鈣粘蛋白mRNA表達(dá)增加,與B組相比C組腎組織中E-鈣粘蛋白mRNA表達(dá)增加。ABC各組內(nèi)2組ILK、α-SMA mRNA表達(dá)量均明顯高于1組小鼠(p<0.05),E-鈣粘蛋白mRNA表達(dá)明顯低于1組小鼠

9、。 結(jié)論： 1)ILK在正常(C57BL/6J×DBA/2)F1代雜交鼠腎組織僅有微量表達(dá)；在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎腎小管顯著高表達(dá),參與了LN的發(fā)病及病程的進(jìn)展。 2)ILK的表達(dá)與E-鈣粘蛋白呈負(fù)相關(guān),與α-SMA呈正相關(guān),ILK可能通過參與LN腎小管上皮細(xì)胞一間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化從而參與LN的發(fā)病及病程的進(jìn)展。 3)氟伐他汀可能通過抑制模型小鼠腎組織ILK表達(dá),降低尿蛋白排泄量,緩解LN。 4)