心肌肥大時NAD(P)H氧化酶的差異表達及阿伐他汀的干預作用.pdf

1、目的：檢測腎性高血壓心肌肥大時NAD(P)H氧化酶調節(jié)亞型P47phox和催化亞基 NOX家族不同亞型的表達變化，觀察阿伐他汀對心肌肥大的防治作用以及與 NAD(P)H氧化酶相關的抗氧化機制。
　　方法：采用兩腎兩夾法(two-kidney two-clip,2K2C)建立腎血管性高血壓大鼠模型，術后4周篩選出符合要求的高血壓大鼠進行實驗。實驗分兩部分，第一部分實驗檢測不同時期 NAD(P)H氧化酶的差異表達，共分6組，每組10只

2、：假手術4周組(S4)；模型4周組(K4)；假手術8周組(S8)；模型8周組(K8)；假手術12周組(S12)；模型12周組(K12)。第二部分實驗檢測阿伐他汀干預作用，共分5組，每組10只大鼠：(1)假手術組(Sham)：假手術大鼠，每天灌胃給予等量的生理鹽水；(2)模型組(2K2C):2K2C手術的高血壓大鼠，每天灌胃給予等量的生理鹽水；(3)阿伐他汀高劑量組(AtoH)：2K2C手術的高血壓大鼠，每天灌胃給予10 mg/kg劑量的

3、阿伐他??；(4)阿伐他汀低劑量組(AtoL)：2K2C手術的高血壓大鼠，每天灌胃給予5 mg/kg的阿伐他?。?5)坎地沙坦組(Can)：2K2C手術的高血壓大鼠，每天灌胃給予10 mg/kg的坎地沙坦，每周測體重，按體重調整用藥劑量，共給藥4周。手術前、給藥前后用尾動脈測壓法測量血壓。實驗結束時，頸動脈插管至左心室檢測血流動力學參數，處死大鼠、腹主動脈采血、取左心室稱重，計算左心室體質量指數；取部分左心室行HE和MASSON染色；其余

4、部分凍于-80℃冰箱做以下實驗：取部分心肌和主動脈作冰凍切片，用 DHE孵育后在共聚焦顯微鏡下觀察活性氧產生，記錄熒光強度并進行各組間比較；應用Western Blot和PCR方法檢測胚型基因ANF、BNP、β-MHC以及NAD(P)H氧化酶的催化亞基NOX家族的不同亞型 NOX2、NOX4和調節(jié)亞基 p47phox的蛋白表達和 mRNA轉錄的變化。
　　結果：(1)術后4周，2K2C組大鼠較 Sham組 AoSP、AoDP、LV

5、ESP、LVEDP以及 LVW/BW顯著升高，而±dp/dtmax顯著降低；ANF、BNP、β-MHC等肥大因子表達明顯上升，觀察4、8、12周 ANF、BNP、β-MHC的表達情況，發(fā)現其表達增加呈時間依賴性。(2)4周時，2K2C大鼠NAD(P)H氧化酶的催化亞基NOX家族的不同亞型NOX2、NOX4和調節(jié)亞基p47phox的蛋白表達和 mRNA轉錄水平已有明顯上升，在8周、12周時上升情況更加顯著。(3)阿伐他汀和坎地沙坦治療4周

6、后，發(fā)現二者能顯著升高±dp/dtmax，坎地沙坦可以明顯降低各項血壓指標，而阿伐他汀無論低劑量還是高劑量都無明顯降血壓作用。(4) HE染色顯示模型組大鼠左心室呈明顯的肥厚生長，MASSON染色顯示心肌血管周膠原面積(PVCA)明顯增大。阿伐他汀和坎地沙坦治療4周能夠顯著抑制這些變化，并且阿伐他汀高劑量組效果好于阿伐他汀低劑量組。(5)2K2C組大鼠心室肌中活性氧產生明顯增多，給予阿伐他汀和坎地沙坦后，發(fā)現心肌組織中的活性氧含量明顯下

7、降，氧化應激狀態(tài)減輕。(6)RT-PCR和Western blot結果顯示2K2C組大鼠心肌中NOX2、NOX4和P47phox表達水平明顯上調，給予阿伐他汀和坎地沙坦后， NOX2、NOX4和 P47phox的表達受到抑制，且阿伐他汀呈劑量依賴性降低NOX2、NOX4和P47phox的表達。
　　結論：(1) NAD(P)H氧化酶參與腎性高血壓心肌肥大的發(fā)生與發(fā)展過程。(2)阿伐他汀和坎地沙坦能顯著抑制 NAD(P)H氧化酶亞基