p38MAPK在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織的表達及氟伐他汀的干預作用.pdf

1、目的：(1)觀察 p38 絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化 p38 絲裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、轉化生長因子β1(TGF-β1)在不同時期cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織的表達情況,初步探討p38MAPK是否參與了cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠的發(fā)病及病情進展；(2)用氟伐他汀作為干預因素,研究其是否可通過影響p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1的表達延緩cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎纖維化進程,以及不同劑量氟

2、伐他汀對不同時期oGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎臟纖維化的療效差異。 方法：將48只雌性(C57BL/6J×DBA/2)F1代雜交鼠隨機分成模型對照組(A組)、低劑量氟伐他汀干預組(B組5mg/(kg·d))、高劑量氟伐他汀干預組(C組1Omg/(Kg·d))和正常對照組(D組),每組12只。A、B、C組小鼠建立cGVHD狼瘡樣腎炎模型,B、C組小鼠每日氟伐他汀灌胃,A、D組小鼠等體積生理鹽水灌胃。自首次注射淋巴細胞第二周開始,每隔兩

3、周收集一次各組小鼠24h尿液,并用雙縮脲比色法測定尿蛋白量。第12、16周末分別隨機處死各組中的6只小鼠(12周組為1組,16周組為2組,即A、B、C、D組小鼠分為A1、B1、C1、D1和A2、B2、C2、D2組),留取腎組織標本,采用HE和Masson染色觀察腎臟組織病理學變化,并用免疫組織化學及Western blot法檢測p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白定位及定量表達,應用RT-PCR法檢測p38MAPK、TG

4、F-β1mRNA的表達。 結果：(1)cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠自第4周開始出現(xiàn)尿蛋白,且尿蛋白量逐漸升高,A、B、C組各時間點的24h尿蛋白量均高于D組小鼠(P<0.01),經氟伐他汀干預后尿蛋白量明顯下降(P<0.01),C組尿蛋白量與B組比較差異亦有顯著性(P<0.05)；(2)HE染色顯示A組小鼠腎小球系膜細胞和內皮細胞增生,可見萎縮硬化的腎小球；腎小管擴張或呈多灶性萎縮及空泡變性,管腔內可見大量蛋白管型,間質中有大量單個

5、核細胞浸潤和基質沉積；A2組小鼠腎小球硬化及腎間質基質沉積較A1組更為明顯；藥物干預組(B、C組)小鼠上述病變減輕,腎小球細胞增生減輕,腎間質炎癥細胞浸潤和基質沉積減少；Masson染色觀察A1組小鼠腎小球及腎小管間質可見少量膠原纖維沉積,A2組小鼠腎組織可見腎小球及腎小管間質大量膠原纖維沉積,腎小球硬化和腎間質纖維化；(3)A1組小鼠腎組織p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白表達及p-p38MAPK活化程度(p-p38

6、MAPK/p38MAPK)較D1組均明顯增強(P<0.01),A2組更加明顯,經氟伐他汀干預后B、C組小鼠腎組織以上蛋白表達及p-p38MAPK活化程度顯著降低(P<0.05),C組與B組比較降低更為明顯(P<0.05);p-p38MAPK活化程度與TGF-β1表達水平呈正相關(r=0.818,P<0.01)；(4)A1組小鼠腎組織p38MAPK、TGF-β1mRNA表達較D1組均明顯增強(P<0.01),A2組更加明顯,B、c組小鼠腎

7、組織p38MAPK、TGF-β1mRNA的表達顯著降低(P<0.05),C組與B組比較其表達降低亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結論：p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1在正常腎組織中有少量表達,在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織中p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白及p38MAPK、TGF-β1mRNA表達均顯著升高,且p-p38MAPK活化程度與TGF-β1表達水平呈正相關,提示p38MAPK可能