MMP-9-TIMP-1在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織中的表達(dá)及纈沙坦、氟伐他汀的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的： 1)觀察慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼瘡樣腎炎模型小鼠腎組織中MMP-9/TIMP-1的表達(dá)； 2)觀察纈沙坦、氟伐他汀是否通過影響MMP-9、TIMP-1表達(dá)及減少尿蛋白從而改善狼瘡腎炎。 方法： 模型建立參照文獻(xiàn)。將cGVHD狼瘡樣腎炎模型小鼠隨機(jī)分為模型組(B組)、纈沙坦組(C組)和氟伐他汀組(D組)，每組6只，另取6只正常同齡雌性(C57BL/6J×DBA/2)F1雜交鼠為對照組(A組

2、)。小鼠首次注射淋巴細(xì)胞第2周起每日灌胃給藥，每2周收集尿液一次，12周后處死。尿蛋白量檢測采用雙縮脲法測定法；MMP-9,TIMP-1蛋白檢測采用免疫組織化學(xué)方法；MMP-9,TIMP-1 mRNA表達(dá)檢測采用RT-PCR；MMP-9活性采用明膠酶譜法。 結(jié)果： 1)B、C、D組小鼠24小時(shí)尿蛋白量均顯著高于A組小鼠(P<0.01)；C、D兩組小鼠24小時(shí)尿蛋白量均低于B組小鼠(P<0.05)。 2)腎組織HE

3、染色：B組小鼠腎小球彌漫性腫脹增大或萎縮硬化，腎小球細(xì)胞顯著增生，炎癥細(xì)胞浸潤，腎小管變性、萎縮，可見管型，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤；C及D組上述病理改變較B組明顯減輕，腎小球細(xì)胞增生減輕，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤減少。 3)免疫組織化學(xué)檢測：B、C、D組小鼠MMP-9蛋白主要表達(dá)于腎小球、腎小管及間質(zhì)血管壁上，B組表達(dá)量顯著高于C、D組，A組小鼠僅在少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞有微弱表達(dá)；B、C、D組小鼠TIMP-1蛋白主要表達(dá)于腎小管，B組表達(dá)量

4、顯著高于C、D組，A組小鼠僅在少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞有微弱表達(dá)，半定量結(jié)果示：B、C、D組MMP-9、TIMP-1表達(dá)較A組顯著增加，且上述各值在C、D組中較在B組中顯著降低(P<0.01)，C、D組間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 4)半定量RT-PCR檢測：B、C、D三組小鼠腎組織MMP-9、TIMP-1mRNA表達(dá)均顯著高于A組小鼠(P<0.01)；且上述各值在C、D組中較在B組中顯著降低(P<0.01)，C、D組間沒有統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)差異(P>0.05)。 5)SDS-PAGE明膠酶譜法檢測MMP-9表達(dá)活性：B、C、D組小鼠腎組織MMP-9表達(dá)活性較A組明顯增強(qiáng)；C、D組表達(dá)活性均較B組低。 6)MMP-9表達(dá)與腎小球細(xì)胞增殖的相關(guān)性：腎組織MMP-9表達(dá)與腎小球細(xì)胞增殖成顯著正相關(guān)(r=0.635，p=0.005)。 7)MMP-9/TIMP-1平衡關(guān)系：半定量免疫組織化學(xué)及RT-PCR檢測結(jié)果顯示B、C、D組小鼠腎組織中MMP-9/T

6、IMP-1比值均明顯高于A組小鼠兩者的比值，C、D組小鼠腎組織中MMP-9/TIMP-1比值均明顯低于B組小鼠兩者的比值(P<0.01)。 結(jié)論： 1)MMP-9在對照組小鼠腎組織中表達(dá)及活性較微弱；在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎小球及腎小管中表達(dá)明顯增加，以腎小管更為明顯；MMP-9活性顯著增強(qiáng)；且腎小球中MMP-9陽性表達(dá)與系膜細(xì)胞增生成正相關(guān)。TIMP-1在對照組小鼠腎組織中表達(dá)較微弱；在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎小

7、管中表達(dá)明顯增加。且24小時(shí)尿蛋白量較對照組小鼠顯著增多。因此MMP-9、TIMP-1表達(dá)及活性的異?？赡軈⑴cLN蛋白尿形成及其發(fā)病過程。 2)纈沙坦及氟伐他汀降低cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織MMP-9、TIMP-1表達(dá)及MMP-9活性，并降低尿蛋白量從而緩解LN，并降低尿蛋白量從而緩解LN，且兩種藥物在治療上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3)cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織MMP-9、TIMP-1表達(dá)均異常增加，MMP-9/TIMP