MMP-9-TIMP-1失衡與動脈粥樣硬化的關(guān)系及氯沙坦作用的實驗研究.pdf

1、目的：在動脈粥樣硬化（AS）的研究中，斑塊的胞外基質(zhì)（ECM）成分的變化與疾病的進展有重要聯(lián)系，而基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）和金屬蛋白酶組織抑制物（TIMPs）的平衡對維持ECM的動態(tài)平衡有著十分重要的作用.建立合適的AS動物模型是研究其發(fā)病機制及探討治療措施的重要前提條件.該實驗從AS的主要的三種發(fā)病機制出發(fā)，建立和比較了三種建立大鼠AS模型的方法;同時以該模型為基礎(chǔ)，探討了MMP-9/TIMP-1的動態(tài)平衡與AS的關(guān)系;也研究了血管

2、組織及血漿血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）水平與AS的關(guān)系;探討了AngⅡ 1型受體拮抗劑氯沙坦是否具有抗AS作用，以及機制如何.實驗方法：1、將實驗大鼠分為5組：正常對照組、高脂組（高脂飼料喂養(yǎng)）、高脂+維生素D負荷組、高脂+維生素D負荷+球囊損傷組、氯沙坦組（在高脂+維生素D負荷+球囊損傷組基礎(chǔ)上加氯沙坦干預(yù)），喂養(yǎng)3個月后，測血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、CA水平，并通過對比各組胸主動脈的內(nèi)中膜厚度變化、HE染色、CD68及α平

3、滑肌肌動蛋白（α-actin）的免疫組化，比較了三種大鼠AS模型.2、應(yīng)用免疫組化、Western-blot、Zymography、RT-PCR的方法，在已建立的大鼠AS病變的整體模型中觀察了MMP-9和TIMP-1的基因、蛋白及酶活性的表達模式的變化，也觀察了氯沙坦有無抗AS作用及MMP-9和TIMP-1的變化.3、運用放射免疫分析法測定了各實驗組的AngⅡ水平（血管組織及血漿），以胸主動脈內(nèi)膜厚度作為AS嚴重程度指標，探討了兩者之間

4、的關(guān)系.4、在體外，分離培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細胞，運用Western blot\Zymography以及RT-PCR的方法，觀察了不同濃度的AngⅡ、氯沙坦及兩者共同作用對大鼠VSMC產(chǎn)生MMP-9和TIMP-1基因、蛋白及酶活性的影響.結(jié)論：1、大鼠可作為研究AS的良好動物模型，通過合適的干預(yù)，模擬出AS斑塊.單純給予大鼠高脂飼料（含膽固醇、膽酸鈉、硫氧嘧啶、豬油）不易形成AS病變;給予大鼠高脂飼料加維生素D負荷僅僅導(dǎo)致以VSMC增生為

5、主的纖維增生性動脈硬化;給予大鼠含高脂飼料+維生素D負荷+內(nèi)膜球囊損傷術(shù)可形成較成熟AS病變斑塊.2、隨著AS進展，斑塊MMP-9及TIMP-1蛋白、基因和酶活性水平逐漸增強，反映AS的ECM降解及合成代謝均明顯增強;AS各期的MMP-9/TIMP-1值變化，說明纖維增生性動脈硬化斑塊ECM合成強于降解，AS早期及較成熟動脈硬化期斑塊ECM降解強于合成，且后者強于前者;氯沙坦可通過減低MMP-9，升高TIMP-1起抗動脈粥樣硬化作用.3