合成短肽S247對(duì)呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷治療作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、機(jī)械通氣作為患有急性呼吸衰竭和其它嚴(yán)重肺部疾病的病人的一種最基本的生命支持手段已被廣泛使用在重癥監(jiān)護(hù)病房。臨床和實(shí)驗(yàn)關(guān)于呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷(ventilator-inducedlunginjury，VILI)的研究最近越來(lái)越被人所關(guān)注，研究證明，大潮氣量通氣和/或高水平呼吸末正壓通氣均可導(dǎo)致這種以通透性肺水腫伴相關(guān)細(xì)胞因子釋放為特征的肺損傷，其中，代表性的細(xì)胞因子有IL-1β、IL-6、MIP-2、TNF-α。造成呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷的原

2、因涉及多個(gè)方面，生物傷是其中一個(gè)重要的原因和組成部分，它已經(jīng)成為目前研究VILI的熱點(diǎn)之一，其發(fā)生涉及到多種細(xì)胞內(nèi)機(jī)制。機(jī)械牽拉所產(chǎn)生的力學(xué)信號(hào)通過(guò)跨細(xì)胞膜表達(dá)的整合素向細(xì)胞內(nèi)部傳導(dǎo)，轉(zhuǎn)化為生物化學(xué)信號(hào)，是導(dǎo)致生物傷的一個(gè)重要機(jī)制。肺上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)于機(jī)械牽拉的反應(yīng)的諸多研究證實(shí)，肺上皮細(xì)胞整合素在VILI發(fā)生過(guò)程中起重要作用，它是連接粘著斑激酶(FAK)和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)以及細(xì)胞骨架的橋梁，力學(xué)信號(hào)作用于細(xì)胞外基質(zhì)后，整合

3、素被激活，下游蛋白如粘著斑激酶等隨之一一激活，引起相關(guān)細(xì)胞因子的翻譯和轉(zhuǎn)錄，從而導(dǎo)致肺內(nèi)炎癥因子釋放增加。S247是一種人工合成的三肽化合物，它由精氨酸、甘氨酸和天冬氨酸組成，它與肺上皮細(xì)胞上αv類整合素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于構(gòu)成ECM的纖粘連蛋白(FN)、玻璃體蛋白(VN)、層粘連蛋白(LN)等成分的RGD序列，非特異性阻斷RGD整合素的信號(hào)傳導(dǎo)上游通路，從而能抑制相關(guān)細(xì)胞因子的釋放，減輕肺損傷。本研究著重探討合成短肽S247對(duì)于呼吸機(jī)相關(guān)性肺損

4、傷的治療作用和機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分兩個(gè)部分：(1)不同潮氣量通氣對(duì)大鼠呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷的影響。(2)合成短肽S247對(duì)呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究。 第一部分不同潮氣量通氣對(duì)大鼠呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷的影響 目的：通過(guò)比照不同潮氣量通氣導(dǎo)致呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷的情況，評(píng)估不同潮氣量對(duì)肺損傷的影響。方法：92只成年SD大鼠(250～360g)隨機(jī)分為A組(自主呼吸組)，B組(vt=10ml/kg)，C組(vt=20ml/kg)，及D組

5、(vt=40ml/kg)，每組23只，各組按時(shí)段(1h、2h和4h)再隨機(jī)分為3個(gè)亞組，每亞組5只，共15只，觀察各組通氣1小時(shí)、2小時(shí)和4小時(shí)肺病理改變、肺含水量、肺灌洗液(BALF)中自細(xì)胞總數(shù)、總蛋白(Tp)、乳酸脫氫酶(LDH)含量的變化，每組其余8只用來(lái)觀察4小時(shí)內(nèi)各時(shí)間段生存率。結(jié)果：與對(duì)照組和正常通氣組相比，大潮氣量使BALF中WBC、LDH、Tp含量增加(p＜0.05或p＜0.01)，D組BALF中WBC量、總蛋白、LD

6、H含量較C組為高(p＜0.05)，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)而增加，各組大鼠同時(shí)間段生存率無(wú)明顯差異(p＞0.05)。結(jié)論：潮氣量20ml/kg和40ml/kg通氣均會(huì)導(dǎo)致不同成都的呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷，其中潮氣量為40ml/kg，通氣4h較為適合建立呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷模型。 第二部分合成短肽S247對(duì)呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷治療作用的實(shí)驗(yàn)研究 目的：研究合成短肽S247對(duì)呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷的治療作用和機(jī)制。方法：清潔級(jí)雄性成年SD大鼠隨機(jī)

7、分為3組：對(duì)照組(C組)、肺損傷組(Ⅰ組)和S247治療組(S組)，每組7只，40ml/kg潮氣量損傷性通氣4小時(shí)復(fù)制呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷模型，光境觀察肺病理改變，測(cè)定肺濕/干比，收集肺泡灌洗液，考馬斯亮蘭法測(cè)BALF中總蛋白含量，光境下行wbc計(jì)數(shù)，酶聯(lián)免疫法測(cè)MIP-2、TNF-α含量，免疫組化法測(cè)定各組大鼠肺組織αvβ6整合素。結(jié)果：Ⅰ組死亡2例，存活大鼠肺病理改變明顯，各組肺濕/干比、BALF中總蛋白含量、wbc計(jì)數(shù)以及MIP-2