單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)血小板反應(yīng)蛋白1的表達(dá)及氯沙坦對(duì)其影響.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化是各種慢性腎損害的共同特征，是腎臟疾病進(jìn)展至終末期的共同途徑。大量研究表明，腎間質(zhì)纖維化進(jìn)展與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子B 1(TGF-β 1)表達(dá)及活化增加相關(guān)。血小板反應(yīng)蛋白1(Thrombospondin-1，TSP-1)作為體內(nèi)關(guān)鍵的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β 1)活化因子，通過(guò)激活潛在的TGF-β 1促進(jìn)腎小球硬化及腎間質(zhì)纖維化，在腎臟疾病中的作用越來(lái)越受到關(guān)注。體外系膜細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn)，血管緊張素II(Angiotensi

2、n II，AngII)誘導(dǎo)的TGF-β1的活化也是通過(guò)TsP-1介導(dǎo)的，AngII 1型受體阻滯劑可以抑制AngII誘導(dǎo)的 TSPl的分泌。本試驗(yàn)選用氯沙坦對(duì)實(shí)驗(yàn)性腎間質(zhì)纖維化模型進(jìn)行干預(yù)，觀察腎臟病理改變及檢測(cè)TSP-1、TGF-β 1、ColIII的表達(dá)，探討TSP-1高表達(dá)與腎間質(zhì)纖維化關(guān)系，及氯沙坦對(duì)腎間質(zhì)纖維化大鼠腎臟的保護(hù)作用及其可能機(jī)制方法：選擇清潔級(jí)健康雄性SD大鼠45只，體重(200±10)克，隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組(

3、A組)，輸尿管結(jié)扎組(UUO組即B組)，氯沙坦治療組(C組)，每組各15只。將各組大鼠以水合氯醛(0.1ml/kg)腹腔注射麻醉后，行左側(cè)恥骨上切口，沿左腎下極尋找到左側(cè)輸尿管，在中上1/3處用4號(hào)線上下結(jié)扎兩處，然后從中剪斷輸尿管，以防逆行性感染，假手術(shù)組除不結(jié)扎和剪斷輸尿管外，其他手術(shù)過(guò)程同前。術(shù)后各組大鼠均正常飲食。治療組大鼠以氯沙坦50mg/kg/d制成2ml混懸液灌胃，1次/日；假手術(shù)組和UUO組大鼠用生理鹽水2ml/d灌胃，

4、1次/日；三組均于術(shù)前一天開(kāi)始灌胃至術(shù)后第3天、第7天和第14天，分三批留取標(biāo)本。輸尿管結(jié)扎術(shù)后分別于第3、7、14天處死，迅速取出左腎，按冠狀位縱形切開(kāi)，取腎組織的1/2置于10％福爾馬林固定液固定，酒精逐級(jí)脫水，二甲苯透明石蠟包埋，制成5um切片。光鏡HE、Masson染色觀察腎臟病理變化。采用免疫組織化學(xué)染色測(cè)定腎間質(zhì)TSP-1、TGF-β 1、ColIII的表達(dá)，結(jié)果應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x

5、±s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.病理改變：光鏡下觀察，HE及Masson染色A組未見(jiàn)明顯異常，腎小管上皮細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，小管與小管之間間隙緊密，小管間質(zhì)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，小管基底膜光滑、連續(xù)。HE染色B組術(shù)后3天腎小管擴(kuò)張不明顯，間質(zhì)中少量單核細(xì)胞與淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；B組7天可見(jiàn)腎小管明顯擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、水腫、甚

6、至壞死，腎間質(zhì)大量炎單核及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)寬度增加；B組14天可見(jiàn)彌漫的腎小管基底膜增厚皺縮，小管基底膜不同程度斷裂，皮質(zhì)及外髓萎縮的腎小管較多，間質(zhì)中大量淋巴及單核細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)大量纖維增生。C組各時(shí)間點(diǎn)改變均較同期B組改變明顯減輕。Masson染色可見(jiàn)B組術(shù)后3天開(kāi)始出現(xiàn)腎小管擴(kuò)張，腎間質(zhì)寬度增加，間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞增多，膠原成分增加，此后，病變逐漸加重。C組與B組平行相比腎小管間質(zhì)病變程度明顯減輕，腎問(wèn)質(zhì)相對(duì)面積明顯減少(P＜0.05

7、)。三組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。2.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：TSP-1在腎小管間質(zhì)的表達(dá)：A組腎小管間質(zhì)TSP-1極少量表達(dá)，B組3天、7天、14天TSP-1的表達(dá)進(jìn)行性增加，主要表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞，C組TSP-1較同期B組表達(dá)下降。組間、組內(nèi)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。TGF-β 1在腎小管間質(zhì)的表達(dá)：在A組各時(shí)期僅腎小球、腎小管間質(zhì)微量表達(dá)，B組各時(shí)相點(diǎn)TGF-β 1蛋白的表達(dá)隨時(shí)間呈進(jìn)行性升高，且隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)

8、升高程度更加明顯，至第14天表達(dá)最強(qiáng)。C組較同期B組表達(dá)下降。組間、組內(nèi)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)℃ol Ⅲ在腎小管間質(zhì)的表達(dá)：Col Ⅲ在A組僅微量表達(dá)于腎小動(dòng)脈周?chē)?，腎間質(zhì)有極少量表達(dá)。B組Col Ⅲ在腎間質(zhì)中呈棕黃色條索狀分布，隨梗阻時(shí)間時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)量增加。C組與B組平行相比，Col Ⅲ表達(dá)量降低(P＜0.05)。進(jìn)一步對(duì)各組TsP-1的表達(dá)與TGF-β 1、ColⅢ的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，TSP-1與TGF-β 1、