骨髓干細胞動員對單側輸尿管梗阻大鼠腎間質微血管及纖維化的影響.pdf

1、目的：探討干細胞因子(SCF)和粒細胞集落刺激因子(G-CSF)對單側輸尿管梗阻(UOO)大鼠包括血管內皮祖細胞在內的骨髓干細胞的動員效果，并進而探討干細胞的歸巢及對腎小管周微血管和間質纖維化的影響及其可能機制，為干細胞移植在延緩腎病慢性進展中的應用提供新的途徑及理論依據(jù)。 方法： (1)56只雄性Wistar大鼠隨機分為7組：①Control組：皮下注射生理鹽水2ml／(kg-d)，連續(xù)5天。②SCF組：皮下注射SCF

2、200ug(kg-d)，連續(xù)5天。③G-CSF組：皮下注射G-CSF200ug(kg-d)，連續(xù)5天。④SCF-G組：皮下注射SCF200ug(kg-d)和G-SF200ug(kg-d)，連續(xù)5天。⑤Sham組：手術入路方式同UUO組，進腹腔后分離右輸尿管但不結扎輸尿管。術后當天即經皮下注射生理鹽水2ml／(kg-d)，連續(xù)5天。⑥UUO組：行右側輸尿管結扎術。術后當天即經皮下注射生理鹽水2ml／(kg．d)，連續(xù)5天。⑦UU0+SCF

3、-G組：行右側輸尿管結扎術。術后當天即皮下注射SCF200ug(kg-d)和G-CSF200ug(kg-d)，連續(xù)5天。實驗第5天處死大鼠，采集血、尿標本，觀察以下指標的變化：①流式細胞儀檢測靜脈血單個核細胞中CD34+、CD34+／CDl33+細胞。②檢測尿量、尿蛋白以及血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、尿素氮、肌酐水平。 (2)128只雄性Wistar大鼠隨機分為4組，分別為Sham組、SCF-G組、UUO組、UUO+SCF-G組

4、，每組32只。于實驗第5、14、21、28天每組各隨機抽取8只動物處死，采集尿液、血液及腎臟組織標本，觀察不同時間點以下指標的變化：①檢測體重增長、24小時尿蛋白定量以及血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、尿素氮、肌酐水平；②腎間質CD34陽性表達細胞數(shù)目；③腎間質Ⅷ因子陽性表達細胞數(shù)目；④HE、PAS及Masson染色后在光鏡下觀察腎組織形態(tài)改變，并進行間質纖維化及間質的病理損害積分。 (3)采集Sham組、UUO組、UUO+SCF-

5、G組三組大鼠血液、梗阻側殘余尿液及腎臟組織標本，觀察不同時間點以下指標的變化：①檢測血清、尿液及腎皮質內皮素-1(ET-1)含量；②腎皮質血小板反應蛋白1(TSP-1)mRNA表達的變化；③腎皮質血管內皮生長因子(VEGF)mRNA表達的變化。 結論： ①干細胞因子和粒細胞集落刺激因子對干細胞和內皮祖細胞的動員效果并非完全呈平行關系，聯(lián)合使用可提高內皮祖細胞和干細胞的動員率，短期內未見肝、腎毒副作用。 ②聯(lián)合應用

6、干細胞因子和粒細胞集落刺激因子動員的骨髓干細胞可以歸巢至受損的腎臟，有助于減少腎小管周微血管丟失，并進而減輕腎間質纖維化和間質損害，保護腎功能。 ③單側輸尿管梗阻大鼠中存在腎小管周微血管的丟失，并與腎間質纖維化及間質病理損傷密切相關。腎皮質內皮素-1可作為腎小管周微血管損傷的指標之一。 ④在單側輸尿管梗阻大鼠中，血管內皮生長因子和血小板反應蛋白1分別是腎小管周微血管的重要保護因子和損傷因子。血小板反應蛋白l mRNA表達