高脂飲食與性激素缺乏對(duì)小鼠骨量和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化潛能的影響.pdf

1、目的:研究高脂飲食和性腺摘除術(shù)協(xié)同作用對(duì)小鼠骨量和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化潛能的影響,以期進(jìn)一步了解高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖過程在性激素缺乏誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松的發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法:選用8周齡C57小鼠48只,分別對(duì)雌性和雄性小鼠施行性腺摘除(去勢(shì))手術(shù)來建立骨質(zhì)疏松模型,以去勢(shì),性別與喂養(yǎng)飼料的不同分為以下四個(gè)組:OVX-HF(去勢(shì)+高脂飼料喂養(yǎng)),OVX-LF(去勢(shì)+低脂飼料喂養(yǎng)),ORX-HF(去勢(shì)+高脂飼料喂養(yǎng)),ORX-

2、LF(去勢(shì)+低脂飼料喂養(yǎng)),作為實(shí)驗(yàn)組。同實(shí)驗(yàn)組分組,在同樣分組中以假手術(shù)為對(duì)照組。造模期間每周測(cè)量2次體重、1次血糖濃度。造模2個(gè)月后取材,取一側(cè)股骨固定、脫鈣、石蠟包埋,進(jìn)行骨切片HE染色,計(jì)數(shù)骨小梁面積測(cè)量;另取其余上肢和下肢骨進(jìn)行小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)體外培養(yǎng),采用第三代細(xì)胞進(jìn)行多向分化能力實(shí)驗(yàn)。小鼠BMMSCs體外成脂誘導(dǎo)7天后進(jìn)行油紅O染色

3、,于染色同日提取RNA、總蛋白,分別采用RT-PCR和Western blot檢測(cè)與成脂相關(guān)的PPAR-γ和LPL的表達(dá)水平。小鼠BMMSCs體外成骨誘導(dǎo)7天后進(jìn)行堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色、21天后進(jìn)行茜素紅染色,于茜素紅染色同日提取 RNA、總蛋白,分別采用RT-PCR和Western blot檢測(cè)與成骨相關(guān)的Runx2和Sp7的表達(dá)水平;所有數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)后,采用SPSS2

4、0.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:1、小鼠進(jìn)行去勢(shì)手術(shù)后進(jìn)行不同飼料喂養(yǎng)2個(gè)月期間,體重增長(zhǎng)幅度受性別、手術(shù)和飼料三重影響,其中OVX組的體重增長(zhǎng)幅度比SHAM組大(P<0.05),ORX組的體重增長(zhǎng)幅度比SHAM組小(P<0.05),HF組小鼠體重增長(zhǎng)幅度比相應(yīng)的LF組小鼠大(P<0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、小鼠進(jìn)行去勢(shì)手術(shù)后進(jìn)行不同飼料喂養(yǎng)3個(gè)月期間,血糖濃度并未受到影響,在去勢(shì)與假手術(shù)相應(yīng)組別間、高脂

5、飼料喂養(yǎng)組與低脂飼料喂養(yǎng)組相應(yīng)組別間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3、股骨切片HE染色顯示,去勢(shì)組的骨小梁面積明顯小于假手術(shù)組(P<0.05),而高脂飼料與相應(yīng)低脂飼料組相比,沒有明顯差異(P>0.05)。
　　4、油紅O染色結(jié)果顯示,小鼠BMMSCs成脂誘導(dǎo)7天后各組細(xì)胞均有串珠樣脂滴形成,均具有一定的脂向分化能力,其中去勢(shì)組BMMSCs成脂能力較假手術(shù)組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);高脂飼料喂養(yǎng)組BM

6、MSCs成脂能力較相應(yīng)低脂飼料喂養(yǎng)組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　5、BMMSCs成脂誘導(dǎo)7天后成脂相關(guān)基因表達(dá)水平檢測(cè)發(fā)現(xiàn),去勢(shì)組細(xì)胞 PPAR-γ和LPL表達(dá)水平高于假手術(shù)組,RNA水平檢測(cè)其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),蛋白水平檢測(cè)結(jié)果和成脂相關(guān)染色結(jié)果趨勢(shì)相符;高脂飼料喂養(yǎng)組細(xì)胞的PPAR-γ和LPL表達(dá)水平低于相應(yīng)低脂飼料喂養(yǎng)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),蛋白水平檢測(cè)結(jié)果和成脂相關(guān)染色結(jié)果趨勢(shì)相

7、符。
　　6、ALP染色顯示,小鼠BMMSCs成骨誘導(dǎo)7天后,各組細(xì)胞均表現(xiàn)出堿性磷酸酶活性,其中去勢(shì)組 BMMSCs堿性磷酸酶活性較假手術(shù)組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);高脂飼料喂養(yǎng)組與低脂飼料喂養(yǎng)組BMMSCs相應(yīng)組別間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　7、茜素紅染色顯示,小鼠BMMSCs成骨誘導(dǎo)21天后,各組細(xì)胞均可形成礦化結(jié)節(jié),其中去勢(shì)組BMMSCs礦化水平較假手術(shù)組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)

8、;高脂飼料喂養(yǎng)組與低脂飼料喂養(yǎng)組BMMSCs相應(yīng)組別間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　8、BMMSCs成骨誘導(dǎo)21天后成骨相關(guān)基因表達(dá)水平檢測(cè)發(fā)現(xiàn),去勢(shì)組細(xì)胞 Runx2和Sp7表達(dá)水平低于假手術(shù)組,RNA水平檢測(cè)其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與蛋白水平檢測(cè)結(jié)果和成骨相關(guān)染色結(jié)果趨勢(shì)相符;高脂飼料喂養(yǎng)組與低脂飼料喂養(yǎng)組BMMSCs相應(yīng)組別間Runx2和Sp7表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論: