脫細(xì)胞纖維環(huán)基質(zhì)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長和分化潛能的影響.pdf

1、目的：制備脫細(xì)胞纖維環(huán)基質(zhì)（decellularized annulus fibrosus matrix, DAFM）材料，并探討DAFM材料對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)的生長和分化潛能的影響。
　　方法：獲取豬的纖維環(huán)組織并剪碎，依次用胰酶、核酸酶、Triton X-100進(jìn)行消化處理，最后用0.5M醋酸溶液溶解，得到脫細(xì)胞纖維環(huán)基質(zhì)溶液

2、。以該溶液制備DAFM膜，通過DAPI染色觀察脫細(xì)胞效果，掃描電鏡觀察DAFM膜的微觀結(jié)構(gòu)。取2月齡的新西蘭大白兔，通過全骨髓貼壁培養(yǎng)法提取BMSCs。取第3代BMSCs分別接種到DAFM膜和普通培養(yǎng)板上進(jìn)行培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)，通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測BMSCs在DAFM膜和普通培養(yǎng)板上的增殖能力。通過成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)檢測材料對(duì)細(xì)胞分化潛能的影響。
　　結(jié)果：制備了可溶性DAFM，DAFM膜材料經(jīng)DAPI染色呈陰性，顯示細(xì)

3、胞已被徹底脫除。DAFM膜表面粗糙，并保留大量微膠原纖維。所分離純化的BMSCs表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)志物Oct-4和nucleostemin，能向脂肪、骨、軟骨細(xì)胞分化。BMSCs在DAFM膜和普通培養(yǎng)板上都能很好的生長。細(xì)胞在DAFM膜上和普通培養(yǎng)板上經(jīng)過成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化后，通過Oil Red O、Alizarin Red、Safranin O染色證明在DAFM膜上生長的細(xì)胞所形成的脂滴、鈣結(jié)節(jié)、軟骨基質(zhì)粘多糖較普通培養(yǎng)板上的明顯增