滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化潛能的實驗研究.pdf

1、目的： 體外分離培養(yǎng)豬滑膜源性間充質(zhì)干細(xì)胞（synovium-derivedmesenchymal stem cells），探討其在體外多向分化潛能。 方法： 2月齡的長楓雜交豬3 頭，雌雄不限，體重8～10 kg。取豬膝關(guān)節(jié)滑膜組織分離SMSCs 并行原代及傳代培養(yǎng)，待第3代長滿培養(yǎng)皿后，吸去基礎(chǔ)培養(yǎng)液，分別加入特定培養(yǎng)液進行成軟骨、成骨、成脂誘導(dǎo)分化。 成軟骨誘導(dǎo)21d 后行甲苯胺藍染色、免疫組織化學(xué)

2、染色和實時熒光定量PCR 檢測；成骨誘導(dǎo)10d 后行堿性磷酸酶（ALP）染色檢測，21d 后行茜素紅染色檢測；成脂誘導(dǎo)21d 后行油紅O 染色檢測。 結(jié)果： SMSCs 培養(yǎng)24h 后細(xì)胞形態(tài)細(xì)長或呈多角形；48h 后細(xì)胞數(shù)量增多，72h后可見大量紡錘形細(xì)胞，其間散在分布少許小圓形細(xì)胞。第3代SMSCs成軟骨誘導(dǎo)21d 后甲苯胺藍染色陽性，細(xì)胞外有蛋白多糖(Aggrecan)形成，免疫組織化學(xué)染色示有特異軟骨基質(zhì)COLⅡ