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文檔簡(jiǎn)介
1、背景與目的:
胰腺癌是消化系統(tǒng)惡性程度極高、預(yù)后極差的腫瘤,其發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚未闡明。本實(shí)驗(yàn)室前期在胰腺癌患者血清中篩選出Prohibitin可能為胰腺癌相關(guān)免疫原性膜抗原。Prohibitin廣泛分布于各種真核細(xì)胞中,其氨基酸結(jié)構(gòu)保守,既發(fā)揮分子伴侶作用,也具有負(fù)性轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。其對(duì)細(xì)胞代謝、生長(zhǎng)、分化、衰老以及凋亡等諸多方面發(fā)揮著重要的調(diào)控作用,與某些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本研究擬探討Prohibitin同胰腺癌生物學(xué)行
2、為以及化療耐藥之間的關(guān)系,以及Prohibitin蛋白表達(dá)水平與胰腺癌臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后之間的關(guān)系。
材料與方法:
應(yīng)用Real-time PCR和Westem blot檢測(cè)Prohibitin mRNA及蛋自在9株胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平。選用胰腺癌細(xì)胞株AsPC-1和MIAPaCa-2作為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,應(yīng)用siRNA干擾技術(shù)使prohibitin(phb)基因表達(dá)沉寂,觀察干預(yù)前后胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵
3、襲能力的變化,以及對(duì)于吉西他濱和5-FU化療敏感性的變化。通過Annexin V/PI雙染法檢測(cè)凋亡、Caspase-3活性測(cè)定以及Westem blot檢測(cè)凋亡通路相關(guān)調(diào)控蛋白PARP、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9和Bcl-2在phb基因沉默后吉西他濱作用時(shí)表達(dá)水平的變化。收集北京協(xié)和醫(yī)院31例胰腺患者血清標(biāo)本和31健康志愿者的血清標(biāo)本,檢測(cè)血清中Prohibitin蛋白的含量;同時(shí)收集6
4、6例胰腺導(dǎo)管腺癌標(biāo)本,采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Prohibitin蛋白在癌組織與癌旁組織中的表達(dá)情況并評(píng)價(jià)其與患者臨床病理以及預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性。
結(jié)果 :
Prohibitin mRNA和蛋白在9株胰腺癌細(xì)胞中均明確表達(dá)。phb基因沉默后胰腺癌細(xì)胞增殖減弱,遷移和侵襲能力下降;phb基因沉默后胰腺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱和5-FU化療敏感性降低,促進(jìn)耐藥;phb基因沉默后吉西他濱作用時(shí)細(xì)胞凋亡率明顯降低,Caspas
5、e-3活性明顯降低,促凋亡蛋白PARP、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9表達(dá)水平顯著下調(diào),抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)水平顯著上調(diào),差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。胰腺癌患者血清中Prohibitin蛋白含量顯著增高(P<0.001)。Prohibitin蛋白在胰腺癌腫瘤組織中呈高表達(dá)(P=0.009),并與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。Kaplan-Meier生存分析顯示Prohibitin蛋白高表達(dá)提示患者預(yù)后不良,單因
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