早期生長反應(yīng)因子-1的誘騙寡核苷酸對體外培養(yǎng)的VSMC中PCNA的影響.pdf

1、目的: 通過轉(zhuǎn)染針對早期生長反應(yīng)因子-1(early growth response factor-1，Egr-1)的誘騙寡核苷酸(Egr-1 decoy ODNs)的大鼠動脈平滑肌細(xì)胞，檢測血管平滑肌細(xì)胞增殖情況及早期生長反應(yīng)因子-1、增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen，PCNA)表達(dá)變化，探討針對早期生長反應(yīng)因子-1的誘騙寡核苷酸對體外培養(yǎng)的大鼠平滑肌細(xì)胞增殖的影響和作用機制。

2、 方法: 通過組織塊貼壁法進(jìn)行原代大鼠動脈血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)和鑒定，設(shè)計合成Egr-1誘騙、誘騙對照寡核苷酸，轉(zhuǎn)染人工合成的針對Egr-1的誘騙寡核苷酸(Egr-1decoy ODN)，將培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞分為對照組(正常培養(yǎng)細(xì)胞)、誘騙組(轉(zhuǎn)染Egr-1的誘騙寡核苷酸)、誘騙對照組(轉(zhuǎn)染Egr-1誘騙雜碼寡核苷酸)。免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測治療前不同時間點(4h、24h、48h、72h)平滑肌細(xì)胞增殖情況與Egr

3、-1及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)變化，進(jìn)行圖像分析。所有數(shù)據(jù)均采用SAS8.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示，各組間比較應(yīng)用單因素方差分析，p<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 成功進(jìn)行原代血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)培養(yǎng)，經(jīng)細(xì)胞鑒定培養(yǎng)細(xì)胞為高純度的血管平滑肌細(xì)胞。轉(zhuǎn)染Egr-1誘騙寡核苷酸后，用免疫組織化學(xué)法分別觀察各組不同時間點的

4、Egr-1和PCNA表達(dá)情況。實驗發(fā)現(xiàn)：Egr-1在三個實驗組中均有表達(dá)，1h表達(dá)最強，隨著時間的延長呈下降趨勢； PCNA在三個實驗組內(nèi)4h開始表達(dá)，24h到最高峰，之后呈略下降趨勢。在不同時間點，誘騙轉(zhuǎn)染組與對照組相比，均在一定程度上抑制了Egr-1和PCNA表達(dá)，經(jīng)SAS8.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，證明有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:本實驗進(jìn)一步證實Egr-1是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，可以促進(jìn)VSME增殖。體外