核因子-κB反義寡核苷酸對(duì)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化是導(dǎo)致慢性腎功能衰竭的重要原因，而腎小管上皮細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)則是腎間質(zhì)纖維化的重要因素之一。核因子-Kappa B(NF-кB)是腎臟免疫炎癥的樞紐，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β<,1>(Transforming growth factor β<,1>,TGF-β<,1>)是誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的重要因子之一。本文旨在利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將NF-

2、кB反義寡核苷酸導(dǎo)入腎小管上皮細(xì)胞，并以TGF-β<,1>誘導(dǎo)此細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，從而探討NF-кB反義寡核苷酸對(duì)TGF-β<,1>誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)轉(zhuǎn)分化化過(guò)程的抑制作用。 方法：培養(yǎng)腎小管上皮細(xì)胞，分為6組，即TGF-β<,1>組、正義寡核苷酸組、反義寡核苷酸組、反義寡核苷酸對(duì)照組、脂質(zhì)體組、空白對(duì)照組。采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將NF-кB反義寡核苷酸(AS-ODN)導(dǎo)入細(xì)胞，以TGF-β<,1>刺激24小時(shí)后，用RT

3、-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞中NF-кB mRNA及a-SMAmRNA表達(dá)；用熒光光譜法分析a-SMA蛋白含量的表達(dá)。并以倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果：TGF-β<,1>誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞24小時(shí)后，HK-2細(xì)胞中NF-кB mRNA表達(dá)量增加達(dá)四倍以上(P<0.01)；在脂質(zhì)體導(dǎo)入后，HK-2細(xì)胞中NF-кB被抑制達(dá)75﹪，(P<0.05)，而脂質(zhì)體組和正義寡核苷酸組的NF-кBmRNA表達(dá)無(wú)明顯變化(P>0.05)