左旋多巴-芐絲肼微球減少帕金森病大鼠異動(dòng)癥.pdf

1、帕金森病(Parkinson'disease,PD)是老年人常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,它以黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性丟失為主要的病理特征。臨床主要表現(xiàn)為震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)遲緩及姿勢(shì)步態(tài)異常。目前,左旋多巴是治療帕金森病的金標(biāo)準(zhǔn),然而左旋多巴治療5-10年后病人將會(huì)出現(xiàn)各種并發(fā)癥,其中異動(dòng)癥(Ievodopa-induceddyskinesia,LID)就是其中之一。LID的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚,其核心原因可能是由于波動(dòng)性的多巴胺刺激導(dǎo)致紋狀體

2、中PKA通路的過(guò)度活化。PKA活化后激活下游一系列的底物從而引起即早基因的表達(dá),最終導(dǎo)致異動(dòng)癥的發(fā)生。除多巴胺受體參與異動(dòng)癥的發(fā)生外,非多巴胺受體與異動(dòng)癥的發(fā)生也有密切關(guān)系,特別是谷氨酸受體如GluR1可以通過(guò)磷酸化來(lái)調(diào)節(jié)它的功能參與異動(dòng)癥的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)持續(xù)性多巴胺刺激有助于減少帕金森病異動(dòng)癥的發(fā)生。為此,本文利用可降解生物材料聚乳酸.羥基乙酸共聚物(PLGA)包裹左旋多巴/芐絲肼制作微球,這種微球可以均勻緩慢的釋放出包裹的左旋多巴/

3、芐絲肼,同時(shí)利用6-羥基多巴胺(6-OHDA)顱內(nèi)注射制作帕金森病大鼠模型,觀察微球在預(yù)防及減少帕金森病大鼠異動(dòng)癥發(fā)生中的作用并探討其可能機(jī)制。本課題共分為五個(gè)部分:
　　第一部分:包裹左旋多巴/芐絲肼PLGA微球的制備與體內(nèi)外釋放動(dòng)力學(xué)
　　目的:利用PLGA包裹左旋多巴/芐絲肼合成一種可緩慢釋放左旋多巴/芐絲肼的微球。
　　方法:利用掃描電鏡觀察微球的形態(tài),高效液相法檢測(cè)微球的體內(nèi)外釋放動(dòng)力學(xué)及大鼠的血藥濃度。

4、r>　　結(jié)果:微球呈圓形,大小均勻,體內(nèi)外釋放曲線表明微球可以平穩(wěn)緩慢的釋放出其所包裹的左旋多巴/芐絲肼,無(wú)突釋現(xiàn)象發(fā)生。
　　結(jié)論:包裹左旋旋多巴/芐絲肼PLGA微球可以平穩(wěn)緩慢的釋放出包裹的左旋多巴/芐絲肼。
　　第二部分:緩釋左旋多巴/芐絲肼微球改善帕金森病大鼠運(yùn)動(dòng)癥狀的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:觀察包裹左旋多巴/芐絲肼PLGA微球?qū)D大鼠運(yùn)動(dòng)癥狀的影響。
　　方法:通過(guò)6-OHDA立體定向注射至SD大鼠右側(cè)前

5、腦內(nèi)側(cè)束建立單側(cè)PD大鼠模型,選取制模成功大鼠給予普通劑型左旋多巴(12mg/kg)/芐絲肼(15mg/kg,)或等劑量微球皮下注射,計(jì)數(shù)阿樸嗎啡誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)圈數(shù),同時(shí)對(duì)帕金森病大鼠行前肢功能測(cè)定。
　　結(jié)果:微球與同等劑量的左旋多巴/芐絲肼可以相同程度的降低帕金森病大鼠阿樸嗎啡誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)圈數(shù),前肢功能測(cè)定結(jié)果顯示微球可以持續(xù)改善帕金森病大鼠的前肢功能,而普通劑型左旋多巴/芐絲肼治療后期其改善PD大鼠前肢的功能逐漸減弱。
　　

6、結(jié)論:微球與相同劑量的普通劑型左旋多巴/芐絲肼可以相同程度的改善PD大鼠的運(yùn)動(dòng)癥狀。
　　第三部分:緩釋左旋多巴/芐絲肼微球預(yù)給藥減少帕金森病大鼠異動(dòng)癥發(fā)生的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:觀察包裹左旋多巴/芐絲肼PLGA微球預(yù)給藥對(duì)PD大鼠異動(dòng)癥發(fā)生的影響并探討其機(jī)制。
　　方法:通過(guò)6-OHDA立體定向注射至SD大鼠右側(cè)前腦內(nèi)側(cè)束中建立單側(cè)PD大鼠模型,將制模成功的PD大鼠分別給予微球或等劑量的普通劑型左旋多巴(12mg/kg

7、+芐絲肼15mg/kg)皮下注射治療。治療2周后對(duì)大鼠行異常不自主運(yùn)動(dòng)(AIM評(píng)分,并利用Western blot和免疫組化方法檢測(cè)帕金森病大鼠紋狀體中磷酸化多巴胺和環(huán)磷腺苷調(diào)節(jié)的磷酸化蛋白-32(DARPP-32)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2)的表達(dá)。同時(shí)利用Western blot法檢測(cè)帕金森病大鼠紋狀體中△FosB的表達(dá)。
　　結(jié)果:微球在減少帕金森病大鼠AIM評(píng)分的同時(shí)也減少了帕金森病大鼠紋狀體中磷酸化DARPP-3

8、2、ERK1/2的水平以及△FosB的表達(dá)。
　　結(jié)論:微球預(yù)給藥可以減少帕金森病大鼠異動(dòng)癥的發(fā)生,可能是由于微球下調(diào)了帕金森病大鼠紋狀體中PKA通路的活性。
　　第四部分:緩釋左旋多巴/芐絲肼微球治療異動(dòng)癥大鼠的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:觀察包裹左旋多巴/芐絲肼PLGA微球?qū)Ξ悇?dòng)癥大鼠的影響并探討其分子機(jī)制。
　　方法:通過(guò)6-OHDA立體定向注射至SD大鼠前腦內(nèi)側(cè)束中建立單側(cè)PD大鼠模型,將制模成功的PD大鼠給予左

9、旋多巴腹腔注射治療(25 mg/kg+12.5 mg/kg芐絲肼,每天2次)3周制做異動(dòng)癥大鼠模型,將制模成功的異動(dòng)癥大鼠模型分別給予普通劑型的左旋多巴(12mg/kg+芐絲肼15mg/kg)或等劑量微球皮下注射治療三周,在給藥的第1、5、10、15和20天計(jì)數(shù)阿樸嗎啡誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)圈數(shù),并行AIM評(píng)分。利用Western blot和免疫組化方法檢測(cè)異動(dòng)癥大鼠紋狀體中磷酸化Tau蛋白、磷酸化Akt的水平,同時(shí)利用ELISA法檢測(cè)異動(dòng)癥大鼠皮

10、質(zhì)和紋狀體中強(qiáng)啡肽的水平。
　　結(jié)果:微球降低了異動(dòng)癥大鼠阿樸嗎啡誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)、降低了異動(dòng)癥大鼠的.AIM評(píng)分,同時(shí)微球下調(diào)了異動(dòng)癥大鼠紋狀體中磷酸化Tau蛋白、磷酸化Akt水平。此外,微球治療的異動(dòng)癥大鼠其皮質(zhì)與紋狀體中強(qiáng)啡肽的表達(dá)也下降。
　　結(jié)論:微球可以改善異動(dòng)癥大鼠的癥狀,可能與微球降低了紋狀體中磷酸化Tau蛋白及磷酸化Akt的表達(dá),以及下調(diào)皮質(zhì)和紋狀體中強(qiáng)啡肽的表達(dá)有關(guān)。第五部分:緩釋左旋多巴/芐絲肼微球?qū)Ξ悇?dòng)

11、癥大鼠紋狀體谷氨酸受體影響的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:觀察包裹左旋多巴/芐絲肼PLGA微球?qū)Ξ悇?dòng)癥大鼠紋狀體谷氨酸受體的影響。
　　方法:通過(guò)6-OHDA立體定向注射至SD大鼠前腦內(nèi)側(cè)束中建立單側(cè)PD大鼠模型,制模成功的PD大鼠給予左旋多巴(25mg/kg+12.5 mg/kg芐絲肼,每天2次)腹腔注射3周制做異動(dòng)癥大鼠模型,將制模成功的異動(dòng)癥大鼠模型分別給予普通劑型的左旋多巴(12mg/kg+芐絲肼15mg/kg)或等劑量微球皮