Moesin重組表達(dá)及其與血管內(nèi)皮損傷相關(guān)疾病的初步研究.pdf

1、目的：通過重組表達(dá)的方法獲得純化的膜突蛋白（moesin）,利用純化的重組moesin作為抗原建立間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA），檢測(cè)與血管內(nèi)皮損傷相關(guān)疾病的抗膜突蛋白抗體，探討抗膜突蛋白抗體與血管內(nèi)皮損傷相關(guān)疾病的關(guān)系。
　　方法：首先，設(shè)計(jì)針對(duì)moesin的引物，通過PCR擴(kuò)增，得到moesin的編碼DNA，構(gòu)建出能夠表達(dá)moesin的重組質(zhì)粒，用異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）在適當(dāng)溫度和條件下誘導(dǎo)表達(dá)，通過 SDS-PA

2、GE電泳鑒定所表達(dá)的蛋白，并對(duì)重組蛋白進(jìn)行純化。其次，利用純化的重組moesin作建立間接ELISA，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)120例血管內(nèi)皮損傷相關(guān)疾病（20例急性冠脈綜合癥、30例原發(fā)性高血壓、20例頸動(dòng)脈硬化、20例糖尿病及30例血脂異常癥）患者血清抗膜突蛋白抗體，觀察抗膜突蛋白抗體的陽性率。
　　結(jié)果：①表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳分析，確定所得表達(dá)產(chǎn)物為moesin；②抗原的最佳包被濃度為4g/mL，抗體的最佳稀釋倍數(shù)

3、為1：100，酶標(biāo)二抗的最佳稀釋倍數(shù)是1：20000。③在120例血管內(nèi)皮損傷相關(guān)疾病中，抗膜突蛋白抗體的陽性檢出率較高，達(dá)25％～70%，顯著高于正常對(duì)照組的5%（P<0.01）；急性冠脈綜合征組陽性檢出率高達(dá)70%，高于其它疾病組（P<0.05），其它各亞型疾病組之間差異無顯著性（P>0.05）。
　　結(jié)論：①成功地表達(dá)了重組人moesin；②建立了最佳的重組moesin作為抗原檢測(cè)抗膜突蛋白抗體的間接 ELISA反應(yīng)條件；③