巨細(xì)胞、風(fēng)疹病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷及臨床研究.pdf

1、目的：研究并使用兩種新的巨細(xì)胞病毒與風(fēng)疹病毒的基因工程抗原，建立一種可廣泛在出生缺陷一級(jí)預(yù)防中適用的檢測(cè)巨細(xì)胞病毒和風(fēng)疹病毒特異性IgG抗體的簡(jiǎn)便、快速且實(shí)用的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，并在臨床試驗(yàn)中評(píng)估這兩種病毒IgG抗體的檢測(cè)方法的臨床有效性、安全性和可實(shí)用性。
　　方法：制備兩個(gè)新的巨細(xì)胞病毒pp150/p52蛋白和風(fēng)疹病毒E1蛋白，應(yīng)用ELISA方法鑒定其抗原活性?；诿嘎?lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)的間接法檢測(cè)原理，以重組抗原包被聚苯乙烯固相載體

2、，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)各環(huán)節(jié)中的條件，風(fēng)疹病毒IgG抗體以世界衛(wèi)生組織提供的標(biāo)準(zhǔn)品，巨細(xì)胞病毒IgG抗體以意大利DiaSorin公司生產(chǎn)的試劑盒中提供的標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定本方法中的標(biāo)準(zhǔn)血清和質(zhì)控品。在臨床試驗(yàn)部分，采用雙盲法對(duì)1000例育齡婦女血清進(jìn)行巨細(xì)胞病毒IgG抗體和風(fēng)疹病毒IgG抗體的檢測(cè)，最終評(píng)價(jià)本研究建立的檢測(cè)方法在臨床實(shí)踐中的有效性。
　　結(jié)果：重組的巨細(xì)胞病毒pp150/p52蛋白和風(fēng)疹病毒E1蛋白經(jīng)鑒定表現(xiàn)出良好的抗原活性并明顯優(yōu)于

3、其他多數(shù)抗原。通過(guò)比較最佳工藝流程：我們確定使用優(yōu)化后的重組抗原；選擇碳酸鹽緩存液包被HCMV抗原、Tris緩沖液包被RV抗原、以3％脫脂奶粉作為封閉液、使用專(zhuān)供本研究應(yīng)用的具有特色的變色標(biāo)本稀釋液和血清標(biāo)本保存方法。在本研究中，巨細(xì)胞病毒特異的IgG抗體檢測(cè)以0.7IU/ml作為抗巨細(xì)胞病毒IgG抗體的Cut-off值，并界定為巨細(xì)胞病毒已感染過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)。風(fēng)疹病毒特異的IgG抗體檢測(cè)則以15IU/ml作為抗風(fēng)疹病毒IgG抗體的Cut-o

4、ff值并界定為可預(yù)防風(fēng)疹感染的最低免疫力標(biāo)準(zhǔn)。WHO定為10IU/ml，我們考慮到低抗體水平可能發(fā)生再感染，所以定為15IU/ml。通過(guò)比較本研究方法與經(jīng)FDA認(rèn)證的意大利DiaSorin公司的同類(lèi)試劑（標(biāo)準(zhǔn)方法）對(duì)1000例臨床標(biāo)本的特異性IgG抗體檢測(cè)，隨后對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示，本研究建立的兩種方法與標(biāo)準(zhǔn)方法間的檢測(cè)結(jié)果均呈高度相關(guān)性，巨細(xì)胞病毒和風(fēng)疹病毒檢測(cè)方法的Kappa值分別為0.699和0.848，卡方檢驗(yàn)以及

5、McNemar檢驗(yàn)得p值均小于0.05。我們建立的巨細(xì)胞病毒特異的IgG抗體檢測(cè)方法的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值和診斷效率分別為97.2%（923/950）、86.0%（43/50）、96.6%（966/1000）；風(fēng)疹病毒特異的IgG抗體檢測(cè)方法的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值和診斷效率分別為99.6%（775/778）、82.4%（183/222）和95.8%（958/1000）。
　　結(jié)論：本研究建立的方法是針對(duì)在出生缺陷一級(jí)預(yù)防中的特