MiR-223作為鼻咽癌診斷標(biāo)記及其靶基因MAFB功能的初探.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩80頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、[目的]
   鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)作為中國(guó)南方常見(jiàn)的一種鼻咽部腫瘤,具有難以早期診斷,易復(fù)發(fā),易轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)。微小RNA(MicroRNA,miRNA)是一種內(nèi)源性非編碼小RNA,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)室研究證明miR-223能夠抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖和侵襲遷移,促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞凋亡。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)血漿miR-223的表達(dá)和研究miR-223靶基因的功能,為鼻咽癌早期診斷以及

2、尋找新的基因治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
   [方法]
   (1)利用real-time PCR檢測(cè)鼻咽癌患者與健康體檢者的血漿中miR-223的表達(dá)。
   (2)利用基因芯片技術(shù)檢測(cè)miR-223轉(zhuǎn)染前后,鼻咽癌細(xì)胞系CNE2中的基因差異,篩選出miR-223可能的靶基因。利用生物信息學(xué)方法對(duì)miR-223的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)并分析其功能。結(jié)合以上兩種方法確定我們要研究的靶基因——MAFB,并通過(guò)real-time

3、 PCR和western blot對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
   (3)利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù),將Si-MAFB轉(zhuǎn)染入CNE-2細(xì)胞中,抑制MAFB表達(dá)。研究Si-MAFB對(duì)CNE2細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,內(nèi)容包括:CCK-8法及臺(tái)盼藍(lán)活細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)CNE2細(xì)胞增殖能力;平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察CNE2細(xì)胞的克隆形成情況;細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒檢測(cè)CNE-2細(xì)胞周期分布;細(xì)胞創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CNE2細(xì)胞的遷移、侵襲能

4、力;體外血管生成實(shí)驗(yàn)及ELISA試劑盒檢測(cè)IL-6分泌研究CNE-2細(xì)胞血管生成情況。利用real-time PCR及westernblot從mRNA及蛋白水平檢測(cè)MAFB下游基因的表達(dá),對(duì)MAFB的生物學(xué)功能的機(jī)制進(jìn)行研究。
   [結(jié)果]
   (1) miR-223在鼻咽癌初診患者血漿中表達(dá)低于健康體檢者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。miR-223在治療后患者血漿中高于治療前患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
   (2)

5、表達(dá)芯片結(jié)果顯示有10個(gè)基因表達(dá)上調(diào),有11個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。Targetscan等miRNA靶基因預(yù)測(cè)網(wǎng)站預(yù)測(cè)到的靶基因有309個(gè)。MAFB3'UTR存在miR-223的直接調(diào)控位點(diǎn)。MAFB進(jìn)行GO分析發(fā)現(xiàn)其是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,參與基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞增殖。
   (3)轉(zhuǎn)染Si-MAFB入CNE2細(xì)胞24h后,MAFB表達(dá)下降至30%。通過(guò)下調(diào)CNE-2細(xì)胞的MAFB表達(dá)發(fā)現(xiàn),鼻咽癌細(xì)胞CNE-2的生長(zhǎng)增殖能力減低,細(xì)胞周期G1-S期

6、阻滯,侵襲及遷移能力減弱,克隆形成能力下降,血管形成能力下降。Real-time PCR及western blot的結(jié)果顯示MAFB調(diào)控某些增殖周期,侵襲遷移及血管生成相關(guān)基因。
   [結(jié)論]
   血漿miR-223在鼻咽癌患者及健康體檢者體內(nèi)的表達(dá)差異,說(shuō)明其可能作為鼻咽癌診斷的生物標(biāo)記。MAFB作為miR-223的可能的靶基因,下調(diào)其表達(dá)與升高miR-223表達(dá)產(chǎn)生的功能學(xué)結(jié)果一致,所以miR-223可能通過(guò)調(diào)控

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論